Под ред. проф. В. В. Алпатова и др.,
Издательство иностранной литературы, М., 1958 г.

Приведено с некоторыми сокращениями

Полиплоидией называется удвоение числа хромосом. В процессе митоза хромосомы делятся так, что их число удваивается, а ядро не разделяется. Поэтому из диплоидного (греч. диплос - двойной), т. е. содержащего по одной паре каждой из хромосом, ядро становится полиплоидным (греч. полис - много), содержащим по нескольку пар хромосом каждого типа; у человека число хромосом при увеличении вдвое становится равным 96 вместо нормального диплоидного числа 48.

Какое лечение? Это кислота, которая естественным образом формирует наше тело, когда, например, мы едим чипсы или любой жир, чтобы иметь возможность переваривать и устранять эти жиры; теперь в лаборатории было сформулировано, что можно безопасно вводить его в определенных областях, таких как челюсть, и постоянно удалять локализованный жир, то есть навсегда, поскольку он разрушает жировые клетки, как липосакцию, только без хирургии, без анестезии или хирургии, или использования подбородков, или любых принадлежностей в послеоперационном лечении.

Это изменение было впервые обнаружено более 50 лет назад при изучении яиц морских животных, легко доступных для наблюдения. Оно может быть вызвано воздействием на эти яйца морской воды с высокой осмотической концентрацией, хлоралгидрата, стрихнина и даже простого механического встряхивания. Развивается только одна звезда, а не две; в дальнейшем разделившиеся хромосомы отделяются друг от друга, образуя два клубка. Э. Уилсон (1925) писал: «Таким образом, моноцентрический митоз приводит к удвоению числа хромосом без разделения клетки; исходное диплоидное число хромосом превращается в тетраплоидное или становится еще большим, если яйцеклетка проделывает несколько последовательных циклов моноцентрического деления».

Это делается в консультации, примерно через 15 минут. Как делается лечение? Анестезия «фригоре» используется в области, где мы собираемся вводить, а также в минуты до и после лечения. Это не больно, пациенты только сообщают о тепловом ощущении, когда они вводят продукт, и через несколько минут после окончания, но они идут домой без боли, что не требует аналгезии, только в случаях повышенной чувствительности это может быть указано парацетамол день или два.

Через три или четыре дня после того, как у них будет отек области и ощущение воспаления, но это не мешает нормальной жизни. Результаты будут наблюдаться через 4 или 8 недель, и потребуется от 3 до 6 сеансов с минимальным количеством сеансов, чтобы получить удовлетворительные результаты для пациентов. Это всегда будет зависеть от степени ясности и характеристик каждого пациента.

Удвоение числа хромосом, по-видимому, нередко наблюдается в клетках печени (Бимс и Кинг, 1942). Следует также обратить внимание на превосходные иллюстрации в статье Дж. Уилсона и Ледюка (1948). Этот процесс называют также «эндомитозом» - внутренним митозом, за которым не следует разделение ядра. Такой процесс наблюдался также при изучении эмбриональных клеток, растущих в культуре ткани (Стилуэлл, 1952). Некоторые митотические яды могут привести к удвоению числа хромосом в большем проценте клеток, чем методы воздействия, применявшиеся в прошлом. Так, колхицин, действуя на делящуюся клетку, препятствует образованию веретена; хромосомы расщепляются продольно, но не расходятся к полюсам клетки, а поэтому образования дочерних ядер с исходным диплоидным числом хромосом не происходит. Когда действие колхицина прекращается, реконструированное ядро, содержащее удвоенное число хромосом, ведет себя так, как это было описано Уилсоном для яиц морских животных.

Это очень показанное лечение для молодых и зрелых мужчин, где кожа реагирует очень хорошо, потому что у них более толстая кожа и убирается лучше после набухания, с которым хорошо видно мандибулярную арку, и она создает тот аспект мужественности, который так много как.

Для молодых и зрелых женщин это удовольствие, которое мы любим, потому что нам не нужно проходить через операционную, и нам не нужны дни низкого социального статуса, и когда мы становимся людьми, это дает нам молодой и тонкий взгляд, который радует нас.

Это противопоказано людям с избыточной кожей в области и с низким содержанием жира, а также у пациентов, перенесших какое-то хирургическое лечение, которое может исказить анатомию этого района. И потребуется не менее двух сеансов. В последующих сеансах цена будет зависеть от количества продукта.

Бизеле и Каудри (1944) наблюдали увеличение размеров и числа хромосом в клетках эпидермиса, подвергающихся действию метилхолантрена и находящихся на пути к злокачественному превращению. Эти данные мы изложим ы обсудим ниже.

Леван и Хаушка (1953) наблюдали удвооние числа хромосом в асцитных опухолях мышей. Нет никаких сомнений в том, что полиплоидия часто наблюдается в злокачественных клетках и что так же, как и в нормальных клетках, она сопровождается увеличением этих клеток. Однако не всегда легко обнаружить полиплоидию при изучении неделящихся клеток. В работе Монталенти (1949) представлены микрофотографии диплоидных, тетраплоидных и полиплоидных ядер.

До и после 18 недель после двух сеансов лечения. Наблюдайте на изображении не только уменьшение двойного подбородка, но и определение челюсти, и что он кажется тоньше и моложе. Что такое пилинг фоторецептора? Что мы должны знать об этом лечении? Главное, что они могут быть сделаны и рекомендованы летом, чтобы иметь возможность загорать более мирно, потому что они помогают одновременно ремонтировать и защищать. Они также привносят свет в кожу и прекрасно закрывают поры, чтобы показать кожу без макияжа в течение лета.

Они не жалят, они не беспокоят, они приятны, потому что они требуют много мягкого массажа, применяя их для их правильного проникновения. Они не производят шелушение кожи, когда они сделаны. Это лечение, которое в отличие от других пилингов целесообразно делать в течение всего года, включая самые жаркие времена, поскольку благодаря сочетанию его восстанавливающих и фотозащитных средств ему удается защитить и предотвратить появление солнечных повреждений, которые происходят мало понемногу, не осознавая этого в нашей коже, влияя на ее внешний вид и свое здоровье.

Иногда в опухолях можно видеть целый ряд переходных форм между сравнительно небольшими и очень крупными клетками и ядрами. Это было ясно показано Кестлменом (1952) на примере аденомы паращитовидной железы. Такие градации трудно объяснить удвоением числа хромосом, так как изменения объема ядер и клеток не были кратны двум или какому-либо другому целому числу. Аденомы не являются злокачественными опухолями.

Он должен сопровождаться специальным кремом, который мы предоставим в консультации. Попросите нас разъяснить ваши сомнения, мы будем рады помочь вам лично! Они очень безопасны, и что они делают, это создать стимул для образования коллагена клетками, которые их поглощают, создавая новый коллаген и сам по себе, который придает гладкость и структуру коже, где они вставлены. Их очень легко поставить, не нуждаются в анестезии или социальных или трудовых потерях.

Они дают эффект как можно ближе к подтяжке лица без операции. Они просты в нанесении, и вы можете сделать свою нормальную жизнь с первого момента. Результаты естественны, потому что мы получаем только то, чтобы восстановить потерянный объем и не увеличивать то, что нам нужно, чтобы не преобразовать и не дать гармонию фракциям.

В результате большого числа экспериментов с культурой ткани В. Льюис (1948) пришел к выводу, что различия размеров нормальных и злокачественных фибробластов не могут быть кратны отношениям целых чисел 1:2:4:8, как пытались доказать некоторые авторы. Величина митотически делящихся клеток сильно варьирует; по мнению Льюиса, это доказывает, что увеличение клетки не является единственной причиной митотического деления. Лыоис указывает, кроме того, что увеличение клетки нельзя считать критерием ее роста, так как оно может быть следствием накопления воды.

Их можно сделать с помощью пинчазитоса или микроканулы, чтобы избежать морадитоса и дискомфорта. Для улучшения и устранения морщин выражения. Его эффективность заключается в том, что он действует, подавляя нервные импульсы, которые вызывают мышечные сокращения. Этот блок позволяет мышце расслабляться, а линии выражения ослабляются в области, где она применяется, без потери выразительности.

Виртууз Руис является экспертом и национальным профессором применения ботулинического токсина в эстетической медицине. Он также выполняет полную подтяжку лица и шеи с этим белком, а также ставит его в десневую улыбку, бруксизм и подмышечный гипергидроз.

Остается неясным, за счет чего происходит увеличение клетки при полиплоидии. Согласно Даниелли (1951), размеры клетки зависят от числа содержащихся в ней осмотически активных молекул, если только увеличению клетки не противодействует плотность клеточной мембраны. Возможно, при удвоении числа хромосом количество подобных осмотически активных молекул увеличивается. Однако в организме все соматические клетки, огромное большинство которых диплоидно и содержит одинаковое число хромосом, тем не менее резко отличаются друг от друга по величине, причем клетки каждого типа имеют характерные для них размеры.

Лицевые наполнители: Старение лица - это динамический процесс, основанный в основном на прогрессирующей потере эластичности кожи, а также на объеме поддерживающих тканей. Все это вызывает появление лицевых морщин и депрессий. С восстановлением опорных тканей лицевое старение отменяется. Результаты этого лечения являются немедленными и с очень небольшим дискомфортом для пациентов.

Могут появиться небольшие локальные гематомы, эритема или кратковременный отек, которые исчезают быстро и без осложнений. Результаты после применения наполнителей в области носогубных тканей, как у мужчин, так и у женщин. Результаты в углах рта. Наполнение губ с вывихом слизистой оболочки губ.

Современная косметология располагает целым спектром техник и методик, способных существенно омолодить кожу лица. Стоит, правда, отметить, что почти все ныне существующие методы способны омолаживать кожу лишь на время, совершенно не влияя на биологические процессы, происходящие в клетках. Но мы знаем, что старение начинается на клеточном уровне и разумно воздействовать именно на клетки, чтоб обратить этот процесс вспять. Поэтому в косметологии существуют регенеративные технологии, которые опираются на инволюционные биотехнологии. Главным инструментом регенеративных технологий являются фибробласты.

Лицевая биопластика: новое лечение, состоящее из скульптуры лица, сглаживающего морщины и возвращающего округлость и выпуклость молодости, достигая гармоничного и приятного результата, в то время как естественным. Его побочные эффекты минимальны и допускают последующие корректировки, что делает его идеальным для людей, спасающихся от сложных операций и травмирующих послеоперационных действий.

Полученные результаты являются быстрыми и хорошими, с низкой частотой побочных эффектов, таких как незначительное изменение цвета кожи, которое выравнивает нос, затвердевание некоторых областей, мягкие деформации или гранулему. Это позволяет исправить щеки и скулы, а также в области уха, углы рта, ушей и т.д. с немедленным включением пациента в его повседневную жизнь и с результатами, очень похожими на хирургическое лечение и без необходимости проходить послеоперационную длину.

ВАЖНО!

Фибробласты – это клетки соединительной ткани, которые синтезируют межклеточный матрикс. Фибробласты выделяют предшественников коллагена и эластина, а также гликозаминогликанов, самая известная из которых – гиалуроновая кислота. Фибробласты являются зародышевой тканью как у человека, так и у животных. Фибробласты имеют разнообразную форму, в зависимости от местонахождения в организме и от уровня своей активности. Слово «фибробласты произошли от латинского корня «фибра» – волокно и греческого «бластос» – зародыш.

Коррекция щеки и скул. Ментопластика: улучшает контур подбородка или подбородка, подчеркивая его известность и возвышение. Это позволяет исправить любой тип деформации, врожденный или из-за травмы или предыдущих вмешательств; или просто его размер. Это очень благодарное обращение за его впечатляющие результаты и его несколько недостатков.

Поскольку потенциальные побочные эффекты - головные боли, мышечная слабость в обработанных областях, покраснение, боль или опускание век. Когда они появляются, они обычно преходящи и имеют небольшую интенсивность. Кроме того, выполнить полный личинки и шеи с этим белком. Результаты в разных областях применения.

Функции фибробластов

Основная роль фибробластов в организме – синтез компонентов внеклеточного матрикса:

• белков (коллагена и эластина), которые образуют фиброволокна;
• мукополисахаридов (аморфное вещество).

В коже фибробласты отвечают за процесс ее восстановления и обновления. Они синтезируют коллаген и эластин – основной каркас кожи и гиалуроновую кислоту, связывающую в тканях воду. Другими словами, именно фибробласты являются генераторами молодости и красоты нашей кожи. С годами число фибробластов уменьшает, а оставшиеся фибробласты теряют свою активность. По этой причине темпы регенерации кожных покровов снижаются, коллаген и эластин теряют свою упорядоченную структуру, в результате чего появляется больше поврежденных волокон, неспособных выполнять свои прямые функции. В итоге, наступает возрастное увядание кожи: дряблость, сухость, потеря объемов и появление морщин.

Раунды лицевого овала, в дополнение к коррекции двойного подбородка. Его эффект абсолютно естественный, биосовместимый и 100% рассасывающийся. После инъекции может появиться покраснение и даже синяки, которые исчезают спонтанно, и что в любом случае можно скрыть макияж.

Некоторое местное воспаление может появиться в течение нескольких дней. Он применяется в тех людях, которые хотят получить молодую и свежую кожу. Возвращает яркость к лицу и стирает мелкие морщины и солнечные пятна от возраста или беременности. Чем глубже кожура, тем лучше результаты . Пациент немедленно присоединяется к своей социальной и трудовой деятельности и начинает применять регенерирующие кремы и очень высокую защиту от солнца. Процесс регенерации кожи завершается через два-три месяца.

Под влиянием Уф-излучения в коже образуются свободные радикалы, разрушающие коллагеновые и эластические волокна. Но не только свободные радикалы разрушают коллаген и эластин. В процессе разрушения коллагена и эластина также задействованы ферменты коллагеназа и эластаза, которые тоже синтезируются фибробластами. Ферменты расщепляют волокна белков на основные компоненты, из которых затем фибробласты вырабатывают предшественников коллагена и эластина.

Результаты в таких случаях, как акне. Лицевая подтяжка с использованием внутрикожных нитей поддержки, которые, если пожелает пациент, легко удаляются. Его особенность заключается в том, что они несут некоторые арпониты, которые при введении их в дерму открывают и участвуют в создании своего тензора и эффекта подтяжки лица. Логически, может появиться синяк, который можно сразу скрыть с помощью макияжа, и это займет несколько дней, чтобы исчезнуть. Окончательные результаты получены через три-шесть месяцев, период, необходимый для производства и образования волокнистой ткани, что необходимо для получения желаемого тонуса и эластичности кожи.

Можно сказать, что фибробласты играют ключевую роль в процессе круговорота деградации и синтеза клеток и волокон.

Еще раз назовем основные функции фибробластов в организме:

• способствуют эпителизации и заживлению поврежденной кожи за счет стимуляции кератиноцитов;
• ускоряют пролиферацию и дифференцировку клеток;
• играют большую роль в заживлении ран, способствуют перемещению фагоцитов;
• синтезируют коллаген, эластин и гиалуроновую кислоту;
• участвуют в процессах регенерации и обновления кожных покровов.

Как активизировать фибробласты?

Выше мы узнали, каковы причины старения организма, и какую роль в этом процессе играют фибробласты. И тут рождается вполне закономерный вопрос: как активизировать фибробласты? Ведь с возрастом их количество не просто снижается, даже если количество фибробластов остается прежним, они становятся пассивными и полностью теряют свою активность. Задача регенеративных биотехнологий найти способы воздействия на фибробласты, чтоб заставить их «вспомнить молодость». Есть ли успехи в этом направлении? С уверенностью можно сказать, что да.

Визуальная схема вмешательства. Все эти мужчины и женщины старше 40 лет, у которых первые признаки вялости начали появляться, найдут в этом лечении идеальное решение для сокращения мышц лица. Эндопепель также совместим с наполнителями, ботулином токсином типа А, радиочастотой, мезотерапией и т.д. он состоит в выполнении мышечного пилинга с помощью небольших инъекций карбоновой кислоты, чтобы стимулировать восходящие мышцы лица и шеи, создавая тензорный эффект. Это очень простое и эффективное лечение, которое не требует специальной помощи после лечения.

Восполнение в кожи белков молодости – коллагена и эластина – инъекционным методом не дает надежных результатов омоложения. Они способны улучшить характеристики кожи лишь на некоторое время. То есть состояние кожи становится лучше, но процесс старения не приостановлен, биологические часы неумолимо идут вперед. И через некоторое время, после деградации коллагена, эластина и гиалуроновой кислоты, состояние кожи оставляет желать лучшего.

Результаты сразу оцениваются, и через 10 дней пациент будет полностью восстановлен. Это рекомендуется для лечения дряблости кожи лица на любой или теле области, с тем чтобы уменьшить признаки старения кожи путем применения высокочастотных волн, которые генерируют тепло и стимулируют фибробласты, которые производят коллаген и эластин лечение, Это приятное лечение, и с ним мы можем проводить виртуальную мезотерапию, то есть без «пинчацитов» и без боли. У некоторых пациентов молодое лицо может быть замечено сразу же, однако, ретракция кожи может произойти в течение нескольких месяцев после лечения.

Лучшее средство омоложения – это наша естественная система обновления и регенерации. Стимуляция собственных ресурсов организма – вот ключ к нашей молодости. На данный момент существуют регенеративные биотехнологии, способные действительно омолодить организм. Главенствующая роль в этих методиках отводится фибробластам.

Современные регенеративные технологии

В основе современных регенеративных технологий стоит принцип стимуляции аутологичных дермальных фибробластов. Суть этих технологий заключается в пополнении популяции фибробластов молодыми и активными клетками. Этот метод называется SPRS-терапия, что буквально обозначает service for personal regeneration of skin (сервис для индивидуального восстановления кожи).

Это очень безопасная техника. Однако при использовании высоких энергий могут возникать некоторые поражения кожи, например мелкие поверхностные ожоги, которые исчезают спонтанно в дни после сеанса. Мезотерапия - это метод, широко используемый в отношении таких проблем, как целлюлит, лечение рубцов и морщин, выпадение волос и т.д. короче говоря, чтобы получить оптимальное подтверждение кожи, мезотерапия - идеальное лечение. Это средство для увлажнения кожи изнутри. Это делается путем введения этих веществ в дерму для обеспечения питания и гидратации, а также для стимуляции фибробластов.

Как же это происходит? Из кусочка кожи путем определенных лабораторных манипуляций выделяют фибробласты. Отбору и стимуляции подвергаются только молодые и активные фибробласты. Затем их популяция в течение некоторого времени доводится до нужных объемов, и они готовы для внедрения в организм. При внедрении аутологичных (собственных) фибробластов не наблюдается отторжений и аллергических реакций, так как в организм поступают свои собственные клетки. Новые фибробласты способны регенерировать кожные покровы в течение двух лет и даже больше. Результат заметен сразу же после первого сеанса клеточной терапии. Происходит заметное улучшение кожных покровов: исчезает дряблость и сухость, улучшается цвет лица и структура кожи, полностью исчезают мелкие морщины, а глубокие становятся менее заметными.

Фибробласты, стволовые клетки и онкогенез

Многие пациенты отождествляют фибробласты со стволовыми клетками. Поэтому часто задают вопрос, не являются ли фибробласты стволовыми клетками? Нет, нет и еще раз нет. Фибробласты не имеют никакого отношения к стволовым клеткам, использование которых, к слову сказать, запрещено во всем мире. Фибробласты относятся к зрелым, специализированным для определенной ткани клеткам. Они способны превратиться только в фиброциты. Фиброциты – это тоже клетки соединительной ткани, которые не способны делиться. Стволовые клетки – это незрелые, недифференцированные клетки, которые могут дать начало нескольким типам клетки и из которых можно вырастить любую ткань нашего организма.

СТРОЙНАЯ ФИГУРА!

Другой вопрос, часто задаваемый пациентами, способны ли аутологичные фибробласты переродиться в опухолевые клетки? Это совершенно невозможно. Фибробласты не способны переродится в злокачественные клетки, потому что они не поддаются непрямому делению клеток (митозу). Они запрограммированы на определенное количество делений, после чего погибают, а их место занимают новые клетки. После внедрения в кожу фибробласты не делятся, но продолжительное время вырабатывают необходимые вещества, способствующие регенерации и омоложению кожи. Таким образом, они остаются совершенно безопасными аутологичными фибробластами как в процессе культивирования в лаборатории, так и в процессе внедрения в организм.

Культивированные аутологичные фибробласты подвергаются строгому контролю на предмет биологической безопасности и жизнеспособности клеток.

Вы – одна из тех миллионов женщин, которые борются с лишним весом?

А все ваши попытки похудеть не увенчались успехом?

И вы уже задумывались о радикальных мерах? Оно и понятно, ведь стройная фигура - это показатель здоровья и повод для гордости. Кроме того, это как минимум долголетие человека. А то, что человек, теряющий «лишние килограммы » , выглядит моложе – аксиома не требующая доказательств.

Владельцы патента RU 2536992:

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к клеточным технологиям, и может быть использовано в медицине. Способ включает масштабирование диплоидных клеток линии М-20 из криобанка ИПВЭ им. М.П. Чумакова РАМН из ампулы банка посевных клеток 7 пассажа с получением банка рабочих клеток 16 пассажа. При этом клетки 20-33 пассажей, пригодные для использования в лечебных и/или диагностических целях, получают путем культивирования в питательной среде, содержащей 10% фибринолитически активной плазмы (ФАП) человека, содержащей тромбоцитарный фактор роста PDGF в концентрации от 155 до 342 пг/мл. Изобретение позволяет повысить пролиферативную активность диплоидных клеток фибробластов человека. 1 з.п. ф-лы, 2 табл.

Изобретение относится к биотехнологии, иммунологии, медицине, в частности к способу повышения пролиферативных свойств диплоидных клеток фибробластов человека для использования таких клеток в лечебных и диагностических целях, в том числе для определения антивирусной активности интерферонов человека, для заместительной клеточной терапии.

Линии диплоидных клеток человека (ЛДКЧ) обладают неоспоримыми преимуществами перед всеми известными видами клеточных культур своей способностью сохранять в пассажах стабильные биологические и генетические характеристики. Аттестацию ЛДКЧ, предназначенных для производства вакцин, проводят в соответствии с едиными требованиями, разработанными Всемирной организацией здравоохранения . Эти рекомендации взяты за основу национальных критериев аттестации вакцинных ЛДКЧ, разработанных ГНИИСиК МИБП им. Л.А. Тарасевича и МЗ СССР [Методические рекомендации «Аттестация перевиваемых клеточных линий - субстратов производства и контроля медицинских иммунобиологических препаратов» РД-42-28-10-89. МЗ СССР. М., 1989. - С. 16]. Аттестованная линия диплоидных клеток человека имеет ограниченный срок жизни и обладает стабильными биологическими, культуральными и генетическими характеристиками, она свободна от контаминантов (бактерий, грибов, микоплазм, вирусов) и не вызывает образования опухолей у иммуносупрессированных животных. Линия диплоидных клеток должна иметь аттестованный банк посевных клеток на ранних уровнях пассажей (до 10 пассажа), состоящий не менее чем из 200 криопробирок. При пассировании посевных клеток из одной или нескольких криопробирок до уровня 16 пассажа получают рабочий банк клеток, из которого могут быть получены необходимые культуры-продуценты для производства или для исследовательской работы. В России и за рубежом существуют всего несколько линий диплоидных клеток человека (Wi-38, MRC-5, М-22 и др.), аттестованных согласно перечисленным требованиям. Аттестованные ЛДКЧ используют при изгототовлении вакцин против полиомиелита, кори, краснухи, бешенства, респираторной и цитомегаловирусной инфекций, а также интерферона [Т.К. Борисова, Л.Л. Миронова, О.И. Конюшко, В.Д. Попова, В.П. Грачев, Н.Р. Шухмина, В.В. Зверев. Отечественные штаммы диплоидных клеток человека - субстрат для производства вакцин. Медицинская вирусология. Материалы научно-практической конференции «Актуальные проблемы медицинской вирусологии, посвященной 100-летию М.П. Чумакова». М. 2009. Том XXVI. С. 305-307; Л.Л. Миронова, В.Д. Попова, О.И. Конюшко. Опыт создания банка авторских линий перевиваемых клеток и их применение в вирусологической практике. Биотехнология. 2000, с. 41-47]. ЛДКЧ широко применяются in vitro для диагностики вирусных инфекций, анализа токсичности различных препаратов и изделий, для заместительной терапии [Патент РФ №2373944, 23.06.2008. Способ лечения ожоговой раны. А.С. Ермолов, С.В. Смирнов, В.Б. Хватов, Л.Л. Миронова; С.В. Смирнов, В.Б. Хватов. Инновационные технологии местного лечения ожогов в НИИ скорой помощи им. Н.В. Склифосовского. В книге: Новая экономика. Инновационный портрет России. М., Центр стратегического партнерства, 2009. С. 388-390].

В ИПВЭ им. М.П. Чумакова РАМН в 80-х годах 20 века было установлено несколько линий диплоидных клеток из кожи и мышц 8-10 недельных эмбрионов человека. Настоящая работа посвящена модификации производства диплоидных клеток человека для диагностических целей и заместительной клеточной терапии, а именно получению диплоидных клеток фибробластов человека с повышенными пролиферативными свойствами.

Прототип. Патент РФ №1440029 от 22.03.93 г. [Миронова Л.Л., Преображенская Н.К., Соловьева М.Н., Орлова Т.Г. Стобецкий В.И., Крючкова Г.П., Кармышева В.Я., Кудинова С.И., Попова В.Д., Алпатова Г.А. ИПВЭ и НИИЭиМ им. Н.Ф. Гамалеи. Штамм диплоидных клеток кожи и мышц эмбриона человека, используемый в качестве тест-системы для определения антивирусной активности интерферонов человека и размножения вирусов].

Этот штамм ЛДКЧ обозначен М-21, однако культура фибробластов М-21 обладала недостаточной пролиферативной активностью, что снижало время образования монослоя и повышало расход клеток и материалов, и это, в конечном итоге, привело к полному истощению ее запасов. В результате возникла необходимость в новой клеточной линии, пригодной для определения антивирусной активности интерферонов человека и других медико-биологических целей, более экономически выгодной, отличающейся высокой пролиферативной активностью, имеющей банки посевных и рабочих клеток. Эта линия обозначена М-20. На уровне 7 пассажа изготовлен банк посевных клеток. В 2012 году из ампулы банка 7 пассажа изготовлен банк рабочих клеток на уровне 16 пассажа. Банки посевных и рабочих клеток на уровнях 7 и 16 пассажей хранятся в ИПВЭ им. М.П. Чумакова РАМН и позволяют обеспечить как производственные процессы, так и научные исследования.

Отличием настоящего изобретения от ближайшего аналога (прототипа) является повышение пролиферативной активности клеток линии М-20 при использовании 10% фибринолитически активной плазмы (ФАП).

Таким образом, объектом изобретения является способ повышения пролиферативных свойств диплоидных клеток фибробластов человека для медико-биологических целей посредством культивирования клеток из криобанка ИПВЭ им. М.П. Чумакова РАМН, в котором используют диплоидные клетки охарактеризованной линии М-20, которые масштабируют из ампулы банка посевных клеток 7 пассажа и получают банк рабочих клеток 16 пассажа, при этом клетки 20-33 пассажей, пригодные для использования в лечебных и/или диагностических целях, получают путем культивирования в питательной среде, содержащей 10% фибринолитически активной плазмы (ФАП) человека. При культивировании клеток используют, предпочтительно, питательную среду ДМЕМ с 10% ФАП.

Диплоидные клетки человека охарактеризованной линии М-20, получаемые вышеуказанным способом, обладают высокой пролиферативной активностью и пригодны для использования в лечебных и/или диагностических целях.

Схема осуществления способа:

1. Используется одна криопробирка из банка посевных клеток 7 пассажа ИПВЭ им. М.П. Чумакова РАМН

2. Приготовление банка рабочих клеток на уровне 16 пассажа ИПВЭ им. М.П. Чумакова РАМН

3. Восстановление фибробластов линии М-20 из банка рабочих клеток 16 пассажа (ИПВЭ им. М.П. Чумакова РАМН).

4. Получение монослойной культуры фибробластов линии М-20, 17 пассаж.

5. Восстановление биологических свойств фибробластов линии М-20 путем трехкратного пассирования (до 20 пассажа включительно) для репарации возможных повреждений ДНК в процессе криоконсервирования.

6. Получение культур клеток для диагностических целей и заместительной клеточной терапии тиражированием фибробластов линии М-20 с 20 по 33 пассаж с использованием питательной среды, содержащей 10% фибринолитически активной плазмы (с содержанием PDGF от 155 до 342 пг/мл).

Предлагаемый способ обеспечивает получение клеток, обладающих высокой пролиферативной активностью и пригодных для использования в диагностических и/или лечебных целях.

Данный технический результат достигается культивированием фибробластов человека линии М-20 в питательной среде с добавлением 10 % фибринолитически активной плазмы (ФАП), обладающей ростстимулирующим действием и обеспечивающей усиление пролиферативной активности культуры клеток.

ФАП - клинически используемая трансфузионная среда, которую получают из крови внезапно умерших от инфаркта миокарда, острой сердечной недостаточности, кровоизлияния в головной мозг, в первые 6 часов после смерти [приказ МЗ СССР №482 от 14.06.1972 года «Об улучшении обеспечения лечебно-профилактических учреждений и клиник трупными тканями, костным мозгом и кровью»]. Посмертная кровь является полноценной трансфузионной средой, имеющей ряд биологических свойств - в первую очередь повышенный фибринолитический потенциал. В этой связи посмертную кровь предложено также называть фибринолизной. Основные показания к переливанию посмертной крови: острая кровопотеря, шок, анемия различного происхождения, ожоговая травма, обменное замещение при экзогенных отравлениях, заполнение АИКа при использовании экстракорпорального кровоообращения в хирургии [Е.Г. Цуринова. Переливание фибринолизной крови. М., 1960, 159 с; С.В. Рыжков. Заготовка и возможности использования фибринолизной крови в зависимости от срока взятия и причины смерти. Автореф. докт. дисс. Л., 1968, 21 с.; Г.А. Пафомов. Биологическая характеристика крови внезапно умерших и ее использование в хирургической практике. Дисс. докт. мед. Наук. М., 1971, 355 с.; К.С. Симонян, К.П. Гутионтова, Е.Г. Цуринова. Посмертная кровь в аспекте трансфузиологии. М., Медицина, 1975, 271 с.]. В настоящее время используются компоненты посмертной крови: фибринолитически активная плазма, эритроцитная масса, лейкоцитная масса, тромбоцитная масса [Г.Я. Левин. Гемокоагуляционные свойства и клиническое применение плазмы и тромбоцитов кадаверной крови. Автореф. докт. дисс. М., 1978, 31 с; В.Б. Хватов. Препараты фибринолитического и антипротеназного действия из плазмы крови внезапно умерших людей. Дисс. докт. мед наук, 1984, 417 с.; V.B. Khvatov Plasmakinase - a new thrombolytic preparation from postmortem plasma In: Thrombosis and Thrombolysis edd. E.I. Chazov, V.V. Smirnov). Consultants Bureau, N.Y., L, 1986, p. 283-310; В.Б. Хватов. Медико-биологические аспекты использования посмертной крови. Вестник АМН СССР, 1991, 9. С. 18-24; В.Б. Хватов. Трупная кровь - история и современное состояние вопроса. Пробл. гематол. и перелив. крови, 1997, 1. С. 51-59]. Компоненты трупной крови, получаемые от доноров органов, также получили клиническое применение [погибший индивидуум с бьющимся сердцем согласно “Инструкции по констатации смерти человека на основании диагноза смерти мозга» от 20.12.2001 г. №460, регистрация Минюста №3170 от 17 января 2002]. Трансплантация органов, тканей и клеток осуществляется согласно Закону РФ «О трансплантации органов и (или) тканей человека» - в ред. Федеральных законов от 20.06.2000 №91-Ф3, от 16.10.2006 №160-Ф3; В.Б. Хватов, С.В. Журавель, В.А. Гуляев, Е.Н. Кобзева, М.С. Макаров. Биологическая полноценность и функциональная активность клеточных компонентов крови доноров органов. Трансплантология, 2011, 4, с. 13-19; Хубутия М.Ш., Хватов В.Б., Гуляев В.А. и др. Способ компенсации глобулярного объема крови и иммуномодулирующего воздействия при трансплантации. Патент РФ на изобретение №2452519, опубл. 10.06.2012, бюл. №16].

Фибринолитически активную плазму получают из крови внезапно умерших людей, заготовленной на консерванте Глюгицир (соотношение кровь: консервант 4:1) для сохранения ее фибринолитически активных свойств. Отделение плазмы от клеточных элементов крови производят в стерильном боксе с соблюдением всех правил асептики и антисептики и аналогично получению донорской плазмы из консервированной донорской крови. Клиническое использование ФАП в хирургии и травматологии выявило эффект стимуляции заживления ран [И.Ю. Клюквин, М.В. Звездина, В.Б. Хватов, Ф.А. Бурдыга. Способ лечения укушенных ран. Патент на изобретение РФ №2372927, опубл., 20.11.2009, бюлл. №32]. Этот эффект мы связывали с присутствием ростстимулирующих факторов в ФАП, выделяемых активированными тромбоцитами. В дальнейшем в ФАП нами идентифицирован тромбоцитарный фактор роста (PDGF). Ростстимулирующее действие ФАП в культуре клеток человека показано в специальных исследованиях. В клеточную суспензию фибробластов человека линии М-20, содержащую известное количество клеток, добавляли исследуемые образцы ФАП в 10% концентрации и по 10 мл полученной смеси помещали в культуральные флаконы с площадью ростовой поверхности 25 см 2 . Клетки выращивали в течение 3-4 суток при содержании в атмосфере 5% CO 2 и при 37°C. После 3-кратного пассирования проводили подсчет выросших клеток в камере Фукс-Розенталя и определяли отношение числа выросших клеток к числу посаженных - индекс пролиферации (в таблице 1).

Из проведенных опытов следует, что ростовые свойства ФАП обеспечивают высокую пролиферативную активность и не отличаются от таковой эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота. При этом ФАП содержит ростовые факторы тромбоцитов человека, т.е. аллогенного типа, в отличие от эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота - ксеногенного типа. Этот факт является определяющим при трансплантации клеток при заместительной терапии. Отметим, что ростстимулирующее действие на культуру клеток линии М-20 обусловлено, в частности, наличием в ФАП PDGF в концентрации от 155 до 342 пг/мл. Эти данные получены с помощью набора реагентов «Qantikine, Human PDGF-BB Immunoassay» фирмы «R & D Systems» и системы «Multiskan ascent» фирмы «Thermo». Концентрация PDGF-BB в ФАП сходна с его содержанием в сыворотке крови. Так в сыворотке доноров крови и обследованных пациентов содержание PDGF составило от 110 до 880 пг/л, в среднем 244 пг/мл, тогда как в плазме содержание PDGF варьировало от 0-2 пг/мл.

Для лучшего понимания предлагаемого технического решения «производство диплоидных клеток человека линии М-20 для медико-биологических целей» приводим следующий пример.

Клетки линии М-20 16 пассажа восстанавливают из рабочего банка. Для этого криопробирку с клетками извлекают из жидкого азота и помещают в водяную баню при температуре 38°C и после оттаивания содержимое переносят в культуральный сосуд с питательной средой ДМЕМ, содержащей 10% ФАП (с содержанием PDGF от 155 до 342 пг/мл), добавляют антибиотик гентамицин из расчета 1 мл 4% раствора на 1 л питательной среды. Для формирования монослоя клетки культивируют в течение 4-5 суток при 37°C и содержании CO 2 в атмосфере 5%. После формирования монослоя клеток проводят 3 последовательных пассажа, необходимых для репарации ДНК после криоконсервирования. Затем проводят тиражирование клеток с 20 по 33 пассаж. Клетки этих пассажей предназначены для медико-биологических целей. Полученная линия клеток подробно охарактеризована в соответствии с требованиями ВОЗ и ГНИИСиК МИБП им. Л.А. Тарасевича, включая HLA-типирование клеток линии М-20, а также проведено изучение ее цитокинового спектра. Приводим сравнительную характеристику свойств линии М-20 и линии М-22 (таблица 2). Линия М 22 (диплоидные фибробласты человека) лицензирована в качестве вакцинного субстрата и разрешена для производства любых видов медицинских вирусных вакцин, а также применена для лечения ожоговых ран II-IIIA степени [Патент РФ на изобретение №2373944, 23.06.2008. Способ лечения ожоговой раны. А.С. Ермолов, С.В. Смирнов, В.Б. Хватов, Л.Л. Миронова, О.И. Клнюшко, Е.А. Жиркова, B.C. Бочарова].

Линия М-20 установлена в ИПВЭ им. М.П. Чумакова РАМН в 1986 году из кожи и мышц 10-недельного эмбриона человека, полученного в результате аборта от здоровой женщины. Онкологических, венерических заболеваний, гепатита, туберкулеза в анамнезе не обнаружено; генетических и врожденных заболеваний в семье не наблюдалось. Среда культивирования клеток ДМЕМ с добавлением 10% ФАП. Коэффициент рассева 1:3-1:4 дважды в неделю при посевной дозе клеток 7×10 4 кл/мл. Клеточный монослой состоит из ориентированных однородных веретеновидных клеток с овальными ядрами, содержащими 1-3 ядрышка и мелкие глыбки хроматина. В жизненном цикле линии можно выделить 3 фазы развития: становление 1-3 пассажи, активный рост 4-40 и старение 41-52, затем наступала гибель. Клетки линии имеют кариотип человека 2т=46, ХУ. Линия характеризуется высокой генетической стабильностью: 93,3-96,9% клеток имеют диплоидный набор хромосом, клеток с полиплоидным набором не более 1,6%. Пробелов и разрывов, а также кольцевых хромосом не наблюдали. Количество полос изоэнзимов Г-6ФДЕ и ЛДЕ и их электрофоретическая подвижность совпадают с таковыми для эритроцитов человека. Г-6ФДГ медленного типа. При посеве на селективные питательные среды контаминации бактериями, грибами, микоплазмами не обнаружено. Кроме этого контаминации микоплазмами не выявлено при окраске ДНК-флуорохромами Hochst 33258 и оливомицином, а также методом ПЦР. Контаминации вирусами в опытах на сосунках и взрослых белых мышах, морских свинках, кроликах и куриных эмбрионах, а также на гомологичных и гетерологичных культурах клеток не обнаружено. Контроль туморогенности. При введении клеток линии иммунодепрессированным животным опухоли не образовывались. Обратной транскриптазы не обнаружено. HLA-маркеры: Класс I: A*(02.03)/B*(07.40)/CW*(03.07). Класс II: DRB1*(15.16)/DQB1*(05.06). Клетки линии М-20 на уровне 20 пассажа продуцируют мРНК α-интерферона (ИФНα) и интерлейкинов: ИЛ1β, 2, 4, 6, 8, 10, 18.

Таким образом, предлагаемая линия является диплоидной - обладает ограниченным сроком жизни, сохраняет кариотип нормальных клеток человека на протяжении всей жизни, свободна от контаминантов и не обладает онкогенными потенциями. Она охарактеризована на безопасность в соответствии с рекомендациями ВОЗ и требованиями ГНИИСиК МИБП им. Л.А. Тарасевича. В ИПВЭ им. М.П. Чумакова РАМН имеются банки посевных и рабочих клеток, способные обеспечить все потребности производства и научных исследований. Клетки линии М-20 чувствительны к заражению различными вирусами. Дополнительно изучен цитокиновый спектр линии М-20. Знание цитокинового спектра клеток позволяет более точно оценивать результаты при определении интерферонового статуса больных и давать обоснованные рекомендации по применению лечебно-профилактических препаратов.

Диплоидные клетки человека - фибробласты штамма М-20 с повышенной пролиферативной активностью, получаемые предлагаемым способом, могут быть использованы для диагностических целей, в частности для определения активности интерферона (ИФН) в сыворотке крови человека, а также в лечебных целях, например для местного лечения пролежней, укушенных ран, длительно не заживающих и ожоговых ран.

1. Способ повышения пролиферативных свойств диплоидных клеток фибробластов человека, отличающийся тем, что диплоидные клетки охарактеризованной линии М-20 из криобанка ИПВЭ им. М.П. Чумакова РАМН масштабируют из ампулы банка посевных клеток 7 пассажа и получают банк рабочих клеток 16 пассажа, при этом клетки 20-33 пассажей, пригодные для использования в лечебных и/или диагностических целях, получают путем культивирования в питательной среде, содержащей 10% фибринолитически активной плазмы (ФАП) человека, содержащей тромбоцитарный фактор роста PDGF в концентрации от 155 до 342 пг/мл.

2. Способ по п.1, в котором при культивировании клеток используют питательную среду ДМЕМ с 10% ФАП.

Похожие патенты:

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к применению клеток плацентарного перфузата человека в получении лекарственного средства для подавления пролиферации опухолевых клеток у индивида.

Группа изобретений относится к области биотехнологии и онкологии. Способ предусматривает: а) выделение постнатальных тканеспецифичных мультипотентных аутологичных стволовых клеток (АСК) и/или аутологичных прогениторных клеток (АПК) для их последующего протеомного и полнотранскриптомного анализов; б) выделение АСК и/или АПК и/или мультипотентных аллогенных HLA-гаплоидентичных стволовых клеток (HLA-CK) для последующего ремоделирования их протеомного профиля; в) выделение РСК из опухоли пациента; г) протеомный анализ АСК и/или АПК и РСК; д) полнотранскриптомный анализ АСК и/или АПК и РСК; е) определение набора белков, каждый из которых содержится в протеомных профилях как АСК и/или АПК, так и РСК; ж) анализ ранее определенного набора белков для идентификации в РСК внутриклеточных сигнальных путей, не подвергшихся неопластической трансформации в результате канцерогенеза, и определения белков-мишеней, являющихся мембранными акцепторами идентифицированных сигнальных путей; з) анализ полнотранскриптомного профиля экспрессии генов РСК и подтверждение сохранности и функциональной значимости структурных компонентов идентифицированных сигнальных путей в РСК; и) определение белков-лигандов, способных активировать белки-мишени; к) сравнительный анализ полнотранскриптомных профилей АСК и/или АПК с транскриптомными профилями, содержащимися в известных базах данных транскриптомов, для определения пертурбогенов, способных модифицировать профиль экспрессии генов АСК и/или АПК и/или HLA-CK, выделенных для ремоделирования их протеомного профиля, в направлении секреции ранее определенных белков-лигандов; л) ремоделирование протеомного профиля АСК и/или АПК и/или HLA-CK пертурбогенами с получением модифицированного транскриптомного профиля различных клеточных систем, способных оказывать регуляторное воздействие на РСК пациента.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к клеточным технологиям, и может быть использовано в медицине. Популяцию мононуклеарных клеток или неэмбриональных стволовых клеток, обогащенную клетками моноцитарной линии дифференцировки, содержащей промоноциты, применяют для лечения ишемии у субъекта.

Изобретение относится к области биотехнологии и клеточной технологии. Заявленное изобретение направлено на создание плюрипотентных, мультипотентных и/или самообновляющихся клеток, которые способны начать дифференцироваться в культуре в различные типы клеток и способны к дальнейшей дифференцировке in vivo.

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для отбора сперматозоидов в методах вспомогательных репродуктивных технологий. Способ предусматривает размещение в чашке Петри капли спермы и капли культуральной среды на расстоянии друг от друга не более 5 см, соединение капель полосой из вязкой среды с параметрами вязкости 1-4 Па·с, затем инкубируют чашку с содержимым в течение 30-90 мин в условиях, моделирующих естественную среду цервикального канала женского репродуктивного тракта.

Изобретение относится к области медицины, биотехнологии и клеточных технологий. Способ дифференцирования плюрипотентных стволовых клеток, представляющих собой линию клеток человека, в клетки, экспрессирующие маркеры, характерные для линии сформированной эндодермы, включает обработку плюрипотентных стволовых клеток средой, отличающейся тем, что она не содержит активин А и содержит GDF-8, в течение периода времени, достаточного для того, чтобы плюрипотентные стволовые клетки дифференцировались в клетки, экспрессирующие маркеры, характерные для линии сформированной эндодермы.

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложены варианты олигопептида, выделенные из белка RAB6KIFL (KIFL20A), которые способны индуцировать цитотоксические Т-лимфоциты (CTL) в составе комплекса с молекулой HLA-A*0201.

Изобретение относится к области пищевой промышленности и представляет собой способ пивоварения, включающий добавление к суслу термостабильной протеазы после фильтрации сусла, но перед варкой сусла, причем термостабильность протеазы означает, что активность этой протеазы составляет по меньшей мере 70% ее активности, измеренной согласно следующему методу: протеазу разводят до концентрации 1 мг/мл в аналитическом буфере, содержащем 100 ммоль сукциновой кислоты, 100 ммоль HEPES, 100 ммоль CHES, 100 ммоль CABS, 1 ммоль СаСl2, 150 ммоль КСl, 0,01% Тритон Х-100, и с рН, доведенным до 5,5 с помощью NaOH; после чего протеазу преинкубируют i) во льду и ii) 10 мин при 70°С; субстрат, к которому протеаза проявляет активность, суспендируют в 0,01% Тритоне Х-100: для начала реакции в пробирку добавляют 20 мкл протеазы и инкубируют в термомиксере Эппендорфа при 70°С, 1400 об/мин в течение 15 минут; реакцию останавливают помещением пробирок в лед; образцы центрифугируют холодными при 14000 g в течение 3 минут и измеряют оптическую плотность OD590 супернатанта; полученное значение OD590 образцов без протеазы вычитают из полученного значения OD590 образцов, обработанных протеазой; определяют термостабильность протеазы посредством расчета процентной активности протеазы в образцах, преинкубированных при 70°С, относительно активности протеазы в образцах, инкубированных во льду, как 100%-ной активности.

Изобретение относится к области клеточной биологии, клеточной трансплантологии и тканевой инженерии. Способ повышения ангиогенной активности стромальных клеток жировой ткани в тканях и органах включает выделение стромальных клеток жировой ткани, культивирование выделенных клеток в присутствии фактора некроза опухолей-альфа в количествах 5 или 100 нг/мл в течение 24-72 часов с последующим трансплантированием в ткани или органы.

Изобретение относится к области биотехнологии, клеточным технологиям и тканевой хирургии. Способ получения культуры гладкомышечных клеток заключается в том, что вырезают фрагмент кровеносного сосуда, измельчают его на кусочки до размеров не более 2 мм в любом измерении и инкубируют кусочки в культуральном флаконе с предварительно нанесенными на дно флакона царапинами, содержащем среду для культивирования, содержащую 10% эмбриональной фетальной сыворотки, в течение по меньшей мере 10 дней, но не более 24 дней, при температуре 37°С в условиях СО2-инкубатора, отличающийся тем, что упомянутым фрагментом кровеносного сосуда является фрагмент восходящего отдела грудной аорты, вырезаемый в ходе процедуры аортокоронарного шунтирования, а упомянутые кусочки фрагмента восходящего отдела грудной аорты перед инкубированием выдерживают в среде для культивирования, содержащей 0,1% коллагеназы, в течение по меньшей мере 30 минут, но не более 60 минут, при температуре 37°С, после чего промывают средой для культивирования клеток.

Способ получения мезенхимальных стволовых клеток из плюрипотентных стволовых клеток человека и мезенхимальные стволовые клетки, полученные этим способом // 2528250

Изобретение относится к области генетической инженерии, тканевых технологий и медицины. Способ получения мезенхимальных стволовых клеток из плюрипотентных линий стволовых клеток человека включает получение эмбриоидных телец из плюрипотентных стволовых клеток человека, прикрепление эмбриоидных телец к чашке Петри для индукции спонтанной дифференцировки эмбриоидных телец в мезенхимальные стволовые клетки, культивирование с пролиферацией мезенхимальных стволовых клеток при сохранении идентичности мезенхимальных стволовых клеток, и где индукция спонтанной дифференцировки стадии происходит путем формирования петель аутологичного цитокина без добавления внешнего цитокина, также соответствующие клетки, их применение, набор и способ культивирования.

Изобретение относится к области молекулярной биологии, биохимии и медицины. Предложена композиция для индукции миграции стволовых клеток жировой ткани взрослых, которая содержит в качестве активного ингредиента человеческие мезенхимальные стволовые клетки из жировой ткани взрослых в количестве от 1х107 до 1х1010, которые экспрессируют на клеточной поверхности рецептор хемокина или фактора роста, или секреторный продукт из этих стволовых клеток включает рецептор хемокина или фактора роста; где секретируемый продукт стволовых клеток жировой ткани взрослых представляет собой адипонектин; и где человеческие стволовые клетки жировой ткани взрослых подвергаются первичному воздействию смесью, содержащей хемокин или фактор роста.

Изобретение относится к биотехнологии и медицине. Предложен способ экспансии мононуклеарных клеток пуповинной крови (пкМНК) ex vivo в присутствии мультипатентных мезенхимальных клеток (ММСК), включающий культивирование ММСК из стромально-васкулярной фракции жировой ткани до достижения монослоя при концентрации O2 в среде 5%, добавление суспензии пкМНК к монослою ММСК, культивирование в течение 72 часов при концентрации O2 в среде 5%, отбор неприкрепленных пкМНК и замену среды, продолжение культивирования ММСК с прикрепившимися к ним пкМНК в течение 7 дней при концентрации O2 в среде 5%.

Изобретение относится к области биотехнологии и медицины. Предложена композиция, содержащая стволовые клетки из амниотической жидкости человека с фенотипом CD73+/CD90+/CD105+/CK19+, питательную среду, эритропоэтин, эпидермальный фактор роста и коллаген, взятые в эффективном количестве.

Изобретение относится к области медицины и клеточных технологий. Предложен клеточный продукт, содержащий популяцию протоковых стволовых клеток подчелюстной слюнной железы, характеризующихся фенотипом CD49f+/EpCAM+ и после обработки вальпроевой кислотой в концентрации 0,1-40 мМ и культивирования в коллагеновом геле меняющих профиль экспрессии на 1AAT+/PEPCK+/G6P+/TDO+/CYP Р4503А13+, а также приобретающих способность синтезировать мочевину и альбумин.

Изобретение относится к области биотехнологии, клеточной и тканевой инженерии. Описан способ получения резидентных стволовых клеток сердца млекопитающего, экспрессирующих поверхностные маркеры c-kit, и/или sca-1, и/или MDR1, в ходе которого выделяют образцы ткани миокарда, измельчают их, обрабатывают коллагеназой и трипсином, проводят культивирование на культуральной чашке с покрытием из фибронектина методом эксплантной культуры измельченных образцов с последующей иммуноселекцией.

Изобретение относится к области биохимии, биотехнологии и медицины. Предложен N-концевой фрагмент растворимого супрессора иммунного ответа длиной в 21 аминокислоту, имеющий последовательность аминокислот по Seq ID NО: 1, позволяющий стимулировать образование регуляторных Т-лимфоцитов, а также способ стимуляции образования регуляторных Т-лимфоцитов N-концевым фрагментом растворимого супрессора иммунного ответа с Seq ID NО: 1, при введении его в концентрации 0,1-50 мкг/мл.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и представляет собой дерматологический крем, предназначенный для местного лечения бактериальных инфекций кожи и для заживления связанных с ними ран, содержащий фрамицетина сульфат и биополимер, включенные в кремовую основу, которая содержит по крайней мере одно вещество из каждой следующей группы: консервант; первичный и вторичный эмульгатор, выбранные из группы, содержащей кетостеариловый спирт, кетомакрогол 1000, полисорбат-80 и Span-80; парафин в качестве воскообразного продукта; совместный растворитель, выбранный из группы, включающей пропиленгликоль, гексиленгликоль и полиэтиленгликоль-400; азотную кислоту или молочную кислоту и воду, а указанный биополимер предпочтительно является хитозаном.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к клеточным технологиям, и может быть использовано в медицине. Способ включает масштабирование диплоидных клеток линии М-20 из криобанка ИПВЭ им. М.П. Чумакова РАМН из ампулы банка посевных клеток 7 пассажа с получением банка рабочих клеток 16 пассажа. При этом клетки 20-33 пассажей, пригодные для использования в лечебных иили диагностических целях, получают путем культивирования в питательной среде, содержащей 10 фибринолитически активной плазмы человека, содержащей тромбоцитарный фактор роста PDGF в концентрации от 155 до 342 пгмл. Изобретение позволяет повысить пролиферативную активность диплоидных клеток фибробластов человека. 1 з.п. ф-лы, 2 табл.

А рабский поэт XI века Аль-Маарри воскликнул однажды с горечью: «Нам кажется, юности нет износа, но катятся годы камнями с откоса». С тех пор минули столетия. Ученые и медики не тратили время впустую: они трудились, чтобы подарить человечеству методики, способные замедлить процесс старения. Одной из самых совершенных омолаживающих технологий является терапия фибробластами – надежная и безопасная процедура, обеспечивающая поразительный результат. Она позволяет вернуть весну жизни – время, когда мы превосходно выглядим даже после бессонной ночи. Если Ваша кожа требует истинного омоложения, а Вы хотите с каждым днем выглядеть все моложе, достичь желаемого результата помогут современные клеточные технологии.

П ередовые клиники Европы и США уже давно взяли на вооружение прогрессивную методику омоложения фибробластами. За последние 7 лет несколько тысяч американцев участвовали в клинических испытаниях этой технологии, которые показали поразительный эффект омоложения, наступающий у некоторых пациентов уже через несколько недель, у других – только через несколько месяцев. После введения фибробластов пациенты отмечают длительное улучшение качества кожи, позитивные эффекты которого накапливаются до 18-24 месяцев и остаются стабильными 7 лет и более. Результаты исследований оказались настолько убедительными, что процедура была одобрена многими авторитетными медицинскими институтами (например, МСА (Агентство Контроля и управления Лекарств)).

Е ще недавно нашим соотечественникам приходилось отправляться в Англию, Швейцарию или Соединенные Штаты и платить там огромные суммы денег, чтобы пройти курс клеточной терапии. Сегодня процедуры с применением аутологичных фибробластов доступны и в России.

И сследованиям фибробластов в нашей стране посвящена не одна докторская диссертация, их изучением занимаются многие серьезные медучреждения (например, Институт хирургии им. А. В. Вишневского РАМН). Почему же эти клетки человеческого организма вызывают столь сильный интерес ученых? Все дело в их беспрецедентном омолаживающем потенциале. В них таится та самая волшебная формула вечной юности, которую люди пытались вывести в течение многих столетий.

Что такое фибробласты и для чего они нужны?

Слово фибробласт содержит два корня – «fibra», что в переводе означает «волокно», и «blastos» – «росток». Фибробласты – это клетки соединительной ткани, которые имеют ядро и характеризуются округлой или веретенообразной формой и множеством отростков. Это наиболее ценные клетки среднего слоя кожи (дермы), входящие в состав стромально-васкулярной фракции, принципиально разделяющейся на 2 группы:

1. Васкулярные (сосудистые) клетки: эндотелиальные, перициты, гладкомышечные, циркулирующие клетки крови – эритроциты, лейкоциты, моноциты, макрофаги, Т-лимфоциты, преадипоциты.

2. Фибробластоподобные клетки, к которым относятся непосредственно фибробласты и их предшественники – стромальные (они же мультипотентные, мезенхимальные) стволовые клетки.

Не является публичной офертой! Имеются противопоказания. Перед использованием необходима консультация специалиста.

Исходя из вышеприведенной классификации, становится понятно, что фибробласты – это не стволовые клетки, а их более зрелые и высокоорганизованные последователи. В отличие от стволовых клеток, которые могут дать начало клеткам любой ткани нашего организма, фибробласты могут превратиться только в малоактивный фиброцит.

Без фибробластов сохранение структурной целостности соединительной ткани не представлялось бы возможным, поэтому роль фибробластов трудно переоценить – это мощные фабрики, которые вырабатывают и постоянно обновляют структурные компоненты дермы и межклеточного вещества, а также множество биологически активных веществ, влияющих на процессы регенерации:

1. Именно фибробласты синтезируют составные компоненты соединительной ткани, ради воспроизводства которых разрабатываются самые современные и высокотехнологичные косметологические процедуры. Речь идет о коллагене, эластине и гиалуроновой кислоте – натуральных веществах дермы, обеспечивающих ее тургор, упругость, эластичность и увлажненность. Благодаря фибробластам вырабатываются также протеогликан, фибронектин, хондроитинсульфат, ламинин и другие элементы межклеточного матрикса, отвечающие за красоту и здоровье кожи.

2. Фибробласты постоянно обновляют дерму и не позволяют накапливаться в ней поврежденным волокнам. Ферменты, которые выделяются фибробластами, разрушают отжившие свой срок, старые и поврежденные эластин, коллаген и гиалуроновую кислоту, при этом заменяя их новыми и здоровыми. Процесс разрушения-восстановления проходит непрерывно, обеспечивая обновление межклеточного вещества. Особенно интенсивно происходит обмен гиалуроновой кислоты.

3. Фибробласты – это уникальные лекари нашего организма. При любом повреждении они с током крови «сбегаются» в очаг травмы и обеспечивают максимально быстрое восстановление разрушенных участков, заживление ран и эпителизацию (быстрое восстановление эпидермиса – поверхностного слоя кожи).

Не является публичной офертой! Имеются противопоказания. Перед использованием необходима консультация специалиста.

П ервая задача, которую преследуют фибробласты – восстановление барьера для поддержания постоянства внутренней среды, т.е. «залепить дырки». Поэтому они начинают очень активно делиться и в авральном режиме вырабатывать молекулы соединительной ткани, которые в спешке формируются крупные, грубые, незрелые, располагающиеся в тканях хаотично. Так появляется первый рубец – красный, плотный, неэластичный, «слабый».

Ф ибробласты размножаются гораздо быстрее, чем клетки эпидермиса, поэтому, если повреждение базальной мембраны больше 5 мм, то рубец выйдет на поверхность. Если меньше, то восстановится полнослойная кожа.

З атем фибробласты начинают вырабатывать ферменты, разрушающие волокна и постепенно замещать их зрелыми, эластичными, структурными. И рубец бледнеет, становится эластичным, тонким, прочным.

4. Отвечают фибробласты и за регенерацию кожи (восстановление, обновление), так как именно они продуцируют очень важные факторы роста – регуляторные белки (тканевые гормоны), функцией которых является стимуляция деления и роста клеток дермы и эпидермиса, а также формирования новых сосудов. Перечислим только некоторые факторы роста, вырабатываемые фибробластами:

Основной фактор роста фибробластов (bFGF) отвечает за формирование и развитие всех типов клеток кожного покрова, заставляет фибробласты активно вырабатывать коллагеновые и эластиновые волокна, гиалуроновую кислоту.

Трансформирующий ростовой фактор (TGF-бета) отвечает за быструю регенерацию поврежденной дермы. Он притягивает фибробласты к месту повреждения и активизирует выработку ими коллагеновых волокон и фибронектина – веществ, обеспечивающих восстановление травмированной кожи.

Трансформирующие ростовые факторы (TGF-альфа, a-NGF) вызывают неоангиогенез – процесс формирования новых сосудов в коже.

Эпидермальный фактор роста (EGF) ускоряет деление и созревание кератиноцитов.

Фактор роста кератиноцитов (KGF) ускоряют процессы заживления и эпителизации ран, стимулируя размножение и развитие клеток эпидермиса (кератиноцитов).

5. Травма является для фибробластов своего рода сигналом, заставляющим их делиться в ускоренном темпе и продуцировать факторы роста, которые в свою очередь притягивают к очагу повреждения фибробласты и другие клетки, обеспечивающие восстановление поврежденной ткани.

Не является публичной офертой! Имеются противопоказания. Перед использованием необходима консультация специалиста.

Уникальные свойства фибробластов

1. Клетки нашего организма не могут размножаться бесконечно и их количество сокращается приблизительно на 10-15 % каждые 8-10 лет. Причем процесс идет в геометрической прогрессии. Это связано с тем, что при каждом делении клетки утрачивается небольшой фрагмент ДНК. Поначалу теряются участки ДНК (теломеры), не несущие важной информации для функционирования клетки. С каждым делением длина теломеров уменьшается и когда они «заканчиваются» и возникает угроза потери фрагментов ДНК, несущих значимую информацию для клетки, ее деление прекращается. Максимально возможное количество делений составляет в среднем 50 ± 10 и называется «предел Хейфлика», в честь американского ученого, в 1961 году открывшего этот феномен. Отсчет количества делений начинается в эмбриональном периоде и после того, как исчерпывается лимит, начинается старение клеток, тканей и организма в целом.

2. Ранее существовало мнение, что с течением времени фибробласты утрачивают способность к делению и превращаются в фиброциты – зрелые клетки, отличающиеся малой активностью. Однако в результате научных исследований было выяснено: несмотря на то, что количество фибробластов с возрастом уменьшается, они не теряют свои функциональные качества и по-прежнему способны делиться, но по какой-то причине перестают это делать, просто «засыпают» и при необходимости могут переходить вновь в активную форму. По всей видимости, причина этого кроется в наличии фермента теломеразы, которая после каждого деления клетки восстанавливает длину теломера, тем самым увеличивая количество делений фибробласта. Впервые этот механизм, обеспечивающий способность бесконечного деления, был обнаружен у стволовых клеток.

Э то открытие повлекло за собой разработку методики культивирования аутологичных фибробластов с их последующей трансплантацией в дерму пациента. Процедура является по сути дела воплощением мечты о вечной молодости, ведь она предполагает не только устранение возрастных признаков, но и воздействие на саму причину увядания кожи.

Не является публичной офертой! Имеются противопоказания. Перед использованием необходима консультация специалиста.

3. Возраст донора фибробластов не имеет значения для продолжительности их жизни, функциональной активности и способности к делению. Этот феномен связан с тем, что в процессе культивирования происходит их омоложение. К такому выводу пришел Cristofalo с соавторами, проведя многолетние исследования. По его мнению, в лаборатории клетки возвращаются в состояние, характеризующееся высокой функциональной активностью и приближающее их по свойствам к мезенхимальным стволовым клеткам.

4. В процессе выделения фибробластов из кусочка кожи пациента получается первичная культура клеток, содержащая как молодые, так и старые клетки. Далее все эти клетки помещаются в среду, содержащую эмбриональную сыворотку, т.е. в условия, которые наблюдаются в эмбриональном состоянии. При этом стимулируется деление молодых клеток, сохранивших высокие способности к росту, и разбавление или вымывание из культуры старых клеток, которые потеряли способность к пролиферации. Таким образом, культура как бы омолаживается. Помимо этого, по данным Makinodan, старые клетки в подобных условиях реактивируются и в последующем, при введении в дерму заселяют ее и усиленно синтезирует весь комплекс компонентов внеклеточного матрикса и факторов роста, необходимый для поддержания кожи пациента в оптимальном физиологическом состоянии.

Важно отметить, что речь идет о собственных клетках пациента, которые, взрослея, не будут поглощаться макрофагами в отличие от пересаженных донорских клеток.

5. В процессе культивации фибробласты утрачивают ген чужеродности, а также они неспособны вызывать онкологию, что позволяет использовать для терапии «чужие» - донорские клетки, что уже доказано многолетними клиническими испытаниями. Впервые методика культивирования фибробластов появилась в 1968 году и применялась для ускорения заживления ран. В 1998 году FDA одобрила первый клеточный продукт на основе фибробластов Apligraf для применения в камбустиологии (лечения ожогов). И только после этого появилось новое направление в эстетической медицине, а именно терапия фибробластами возрастных изменений, а в стоматологии – лечение гингивитов. Правда, поначалу применялись только донорские фибробласты.

Механизм действия такого метода связан со способностью фибробластов синтезировать коллаген, эластин, гиалуроновую кислоту и другие компоненты межклеточного вещества, а также факторы роста, что ускоряет деление и рост эпителия, и в конечном итоге приводит к восстановлению поверхностного и среднего слоя кожи – эпидермиса и дермы.

Не является публичной офертой! Имеются противопоказания. Перед использованием необходима консультация специалиста.

6. При любом термическом поражении кожи (ожоге или отморожении) происходит повреждение кожи, а степень выраженности воспалительных явлений и длительность (а подчас и способность к восстановлению) зависит от глубины ее поражения:

I степень – покраснение, отек кожи (стихают через 3-4 дня) и боль (сохраняется 1-2 дня) вследствие обратимого поражения поверхностных слоев эпидермиса. В косметологии такое повреждение кожи наносится специально с помощью поверхностных химических или лазерных пилингов с целью омоложения.

I I степень – образование пузырей, наполненных прозрачным содержимым в результате гибели слоев эпидермиса (до базального, росткового слоя) и их отслойкой. На месте ожога в течение некоторого времени держатся сильные боли и жжение, однако в течение 10-14 дней происходит полное восстановление целостности эпидермиса без образования рубцов. Соответствует срединным пилингам.

IIIа степень – неполный некроз кожи с сохранением дермы и ее производных - потовых и сальных желез, волосяных луковиц, из эпителия которых происходит самостоятельное восстановление эпидермиса в течение 4–6 недель, иногда с образованием рубцов кожи с участками гипер- и депигментации.

IIIб степень – полный некроз всей толщи кожи.

IV степень – омертвение кожи и тканей, под ней расположенных. Эпителизация в таких случаях возможна лишь с краев раны и происходит она очень медленно. Самостоятельно может зажить только рана небольших размеров, т.к. возможности восстановления эпидермиса по краям раны составляют не более 5 мм.

Не является публичной офертой! Имеются противопоказания. Перед использованием необходима консультация специалиста.

Важным признаком, отличающим IIIа и IIIб степень, является сохранение болевой чувствительности в первом случае. У детей до полового созревания довольно часто такие ожоги заживают с формированием гипертрофических рубцов. На таком уровне выполняется глубокая лазерная шлифовка или глубокий химический пилинг кожи. Возможно это только на лице, которое характеризуется очень большим количеством придатков кожи, высокой способностью к регенерации, очень активным обменом веществ в клетках и кровоснабжением. На остальных участках кожи нашего тела такое агрессивное воздействие неизбежно приводит к формированию рубцов.

При поверхностных ожогах I, II и IIIа степени фибробласты наносят для комплексного лечения ран большой площади с целью ускорения эпителизации. При глубоких – в сочетании с пересадкой собственной кожи, которой при этом необходимо гораздо меньше.

7. Аутологичные (собственные) и донорские культивированные фибробласты не вызывают аллергических реакций или онкогенеза после трансплантации. Организм распознает их как свои, а не чужеродные клетки, поэтому и не включает механизм защиты от них.

Важный нюанс – омолаживающее действие собственных культивированных фибробластов является гораздо более пролонгированным, чем аналогичное действие донорских клеток. Последних со временем все же распознают и поглощают иммунные клетки нашего организма, поэтому результат остается стабильным не более 2-х лет .

Не является публичной офертой! Имеются противопоказания. Перед использованием необходима консультация специалиста.

Особенности старения

А мериканские ученые опубликовали данные, согласно которым после 44 лет для женщин (исходя из средней продолжительности жизни, составляющей 78,8 лет) и после 40 лет для мужчин (исходя из средней продолжительности жизни, составляющей 72,6 года) человек неминуемо начинает сталкиваться с болезнями. Другими словами, почти половину жизни он обречен угасать, страдая от недугов и немощи. Первые признаки деструктивного процесса старения появляются уже в 30-летнем возрасте. Ситуацию усугубляет современный ритм жизни, сопряженный с психическими перегрузками, который самым пагубным образом влияет на организм человека.

К ак уже говорилось выше, благодаря деятельности фибробластов постоянно происходит обновление дермы за счет баланса двух разнонаправленных процессов: разрушение отживших, старых волокон и синтез новых. НО, в определенный момент по какой-то причине (до сих пор не ясной, т.к. начаться это явление может у людей в разном возрасте) снижается способность фибробластов к делению и синтезу веществ. Вместе с тем процесс разрушения старых волокон будет продолжаться еще долгое время, что повлечет за собой уменьшение объема соединительной, мышечной, костной и других видов тканей. Т. е. процесс разрушения начинает преобладать над процессом созидания.

Благодаря предусмотренному природой резерву клеток, последствия дисбаланса остаются не слишком заметными в течение нескольких лет. Между тем после 40-45 лет избежать возрастных изменений не удается никому и подчас они настигают нас лавинообразно, а многих женщин этот период связан с наступлением менопаузы и началом гормонального старения. Именно поэтому Виктор Гюго назвал данный возраст «старостью юности». Спустя время процесс гибели клеток и тканей останавливается, вновь устанавливается баланс между созидательными и разрушительными процессами, однако к этому возрасту человек превращается уже в «усохшего» старичка или старушку. В стареющей коже уменьшается толщина дермы, содержание влаги в ней падает, в результате кожа теряет упругость и эластичность. Следствием этого является растяжение кожи и образование морщин.

Не является публичной офертой! Имеются противопоказания. Перед использованием необходима консультация специалиста.

П роцессы обновления и регенерации тканей замедляются, что влечет за собой неприятные последствия:

- базальный (ростковый, регенераторный) слой становится тоньше, образуется все меньше кератиноцитов;

Истончаются клетки эпидермиса (роговые чешуйки);

Процесс удаления роговых чешуек с поверхности кожи замедляется, в результате чего роговой слой становится толще;

Дерма стремительно теряет толщину, количество и размер фибробластов, макрофагов, тканевых базофилов и других клеток дермы уменьшается. Они перестают справляться со своими функциями, что рано или поздно приводит к дефициту коллагена, эластина и межклеточного вещества. Начиная примерно с 25-летнего возраста, синтез коллагена и эластина – волокон, благодаря которым кожа выглядит упругой и здоровой – сокращается ежегодно на 1 % ;

Деформируется структура эластиновых и коллагеновых волокон: они становятся толще, ригиднее, чем должны быть в норме, нарушается упорядоченность их расположения;

В организме вырабатывается все меньше гиалуроновой кислоты, что влечет за собой утрату увлажненности дермы, приводит к пересушенности кожи, образованию на ней микротрещинок и морщин, снижению ее эластичности и тургора;

Ухудшается кровоснабжение и поступление питательных веществ к клеткам дермы;

Восстановительные процессы протекают медленно.

Вышеперечисленные изменения не могут не сказываться на внешнем виде кожного покрова. Постепенно нарастает чувство сухости и стянутости кожи, кожный покров становится дряблым, тонким, неэластичным, покрывается мелкими морщинами и пигментными пятнами. Со временем все эти признаки старения накапливаются и приобретают явную выраженность. Особенно быстро стареют открытые участки кожи и места сгибов.

Не является публичной офертой! Имеются противопоказания. Перед использованием необходима консультация специалиста.

Омоложение фибробластами останавливает процесс старения

Н асыщение дермы молодыми фибробластами – максимально естественный, эффективный метод омоложения и профилактики старения, так как он позволяет возродить структуру дермы, а у возрастных пациентов является заместительной терапией.

У никальная процедура клеточного омоложения кожи, основанная на применении аутологичных фибробластов, останавливает процесс снижения запасов собственных клеток дермы. Методика не просто корректирует возрастные изменения, а воздействует на них на уровне микротекстуры: молодые фибробласты омолаживают дерму изнутри, а также стимулируют активность тех фибробластов, которые имеются в организме. Как следствие, повышается скорость деления клеток, быстрее обновляется поверхностный слой кожи, формируются новые молодые коллагеновые и эластиновые волокна, увеличивается содержание в дерме гиалуроновой кислоты. Вы снова наслаждаетесь видом сияющей бархатистой кожи, надолго забываете о морщинах, расширенных порах, пигментных пятнах, шелушении и сухости.

К леточная терапия справляется даже с растяжками – дефектами, которые практически невозможно устранить с помощью прочих малоинвазивных методик. Фибробласты не просто останавливают биологические часы, а заставляют их идти в обратном направлении. А если, спустя какое-то время их активность снизится и они заснут, то простые методы физической травмы, проникающей в дерму (такие как диодное и углекислотное лазерное омоложение кожи), вновь их разбудят и заставят долгое время трудиться, многократно усиливая омолаживающий эффект.

Не является публичной офертой! Имеются противопоказания. Перед использованием необходима консультация специалиста.

В ведение в дерму культивированных в условиях лаборатории фибробластов позволяет вернуть коже свойственные молодости эластичность и упругость. Более того, если в последующем вы будете делать косметологические процедуры или пластические операции, то получите гораздо более выраженный эффект, чем те, кто не активировал предварительно собственные фибробласты и не пополнил их запас.

С казочный эффект использования аутологичных фибробластов оценили уже многие знаменитости. Ведь результаты процедуры действительно поразительны: сеть мелких морщин бесследно исчезает, глубокие складки разглаживаются. День за днем вы наблюдаете в зеркале, как кожа становится все более сияющей и упругой, улучшается ее тонус, разглаживается сеть мелких морщин, а цвет лица становится здоровым. Шея и руки больше не выдают возраст – кожа этих частей тела приобретает подтянутый вид и наполненность. Трансплантация культивированных фибробластов повышает защитно-барьерные свойства кожи, а значит неблагоприятные факторы и стрессы не смогут украсть молодость и красоту.

Т ерапия аутологичными фибробластами значительно эффективнее, чем инъекции Ботокса, которые при длительном и частом применении может вызывать повреждение нервных окончаний и нарушение питания кожи.

П омимо этого, введение фибробластов более результативно, чем заместительная терапия гиалуроновой кислотой, которая омолаживает кожу на небольшой промежуток времени, а затем их необходимо повторять. При частом использовании и с течением времени, на искусственную гиалуроновую кислоту организм начинает вырабатывать антитела, и разрушение введенных препаратов происходит все быстрее. Кроме того, введение избытка (особенно в возрасте до 35 лет!) гиалуроновой кислоты, оказывает тормозящее влияние на синтез структурных компонентов кожи фибробластами, тем самым косвенно ускоряя старение.

Не является публичной офертой! Имеются противопоказания. Перед использованием необходима консультация специалиста.

Показание к терапии фибробластами:

Профилактика старения – инъекции можно начинать с 40 лет, тем самым выполняется заместительная терапия;

Омоложение кожи лица, шеи, декольте, рук устраняет признаки старения: истонченность, дряблость, сниженный тургор и эластичность, пигментацию, атрофичность и мелкую морщинистость;

Улучшение качества кожи тела: живота, спины, бедер. Терапия фибробластами усиливает эластичность и тонус, тем самым оказывая лифтинговый эффект;

Устранение пигментации вокруг глаз;

Ускорение «созревания» молодых рубцов – в «возрасте до 12 месяцев;

Лечение постакне рубцов;

Лечение растяжек;

Подготовка к пластическим операциям и быстрое восстановление после них;

Ускорение восстановления после пилингов, лазерных процедур и т.д.

Противопоказания к терапии фибробластами:

Острые инфекционные заболевания;

Обострение хронических болезней;

Аутоиммунные заболевания соединительной ткани;

Склонность к келоидным и гипертрофическим рубцам;

Онкологические заболевания;

Длительная терапия стероидами;

Беременность, лактация.

Терапия фибробластами

Е сли говорить о терапии аутологичными фибробластами просто, то она состоит из нескольких этапов:

1. Забор кусочка кожи. Его можно брать на любом участке тела, важно только соблюсти размер – около 5*1,5 см. От размера забранного участка кожи зависит количество фибробластов, которое получат в лаборатории «Покровского банка стволовых клеток» (с которым сотрудничает наша клиника). Для того чтобы правильно насытить кожу молодыми клетками, за одну процедуру необходимо (по специальной методике!) ввести достаточное количество фибробластов (около 2-3 миллионов в 1 мл). Поэтому технологи лабораторий просят кусочек кожи побольше.

Не является публичной офертой! Имеются противопоказания. Перед использованием необходима консультация специалиста.

Наиболее часто мы его забираем, иссекая здоровую кожу по ходу существующих на теле рубцов от ранее перенесенных операций или травм, а при их отсутствии из области паха. После забора необходимого участка, ранка зашивается послойно, заканчивая внутрикожным швом, который мы снимаем на 7-10 день после операции. В последствие на этом месте останется тонкий малозаметныйнитевидный шов, который легко прячется даже в самых открытых трусиках.

Для выполнения данного этапа требуется сдать анализы крови: общий клинический, биохимический (глюкоза, АЛТ, АСТ, билирубин, мочевина, креатинин) и коагулограмму.

Для выделения и культивирования фибробластов подходит кожа, удаленная в ходе эстетических операций (подтяжка лица, блефаропластика, абдоминопластика и т.д.). Многие пациенты хотят в последующем повторить процедуру, и технологи сразу культивируют две порции фибробластов, одну из которых хранят в криогенной камере до нужного момента – чтобы не пришлось в следующий раз забирать кусочек кожи.

2. Выделение и культивирование фибробластов в лаборатории «Покровского банка стволовых клеток»: кусочек кожи измельчается, обрабатывается специальными ферментами, промывается физиологическим раствором. Потом вышедшие при этом клетки осаждаются в центрифуге и высеваются на специальную питательную среду. Размножаются до необходимого количества, снимаются с подложки, очищаются от остатков среды, осаждаются в центрифуге.

3. Очень важна система контроля качества полученных в результате культивирования фибробластов. Для этого ежедневно контролируют и удаляют из культуры клетки, обладающие онкогенным потенциалом: ежедневный контроль формы, строения, активности размножения клеток, а также исследование ДНК и при необходимости – уровня экспрессии (выделения) онкогенных маркеров. Помимо этого, контроль качества включает анализ на бактериальную загрязненность и на отсутствие вирусов ВИЧ, гепатитов. На каждую порцию клеток предоставляется паспорт фибробластов, в котором указывается ФИО донора, дата, время изготовления, количество клеток в 1 мл, и отрицательные результаты тестов на онкогенность и инфекции.

Далее возможны варианты – они либо вводятся в физиологическом растворе методом мезотерапии (для омоложения), либо помещаются на специальный гелевый носитель (для заживления ран и ожогов). Занимать весь этот процесс может от 4 до 6 недель.

Не является публичной офертой! Имеются противопоказания. Перед использованием необходима консультация специалиста.

4. Каждая порция клеток готовится не только к определенной дате, но и заранее оговоренному времени, т.к. фибробласты вне тканей человека уязвимы и должны быть введены в течение 6 часов, т.к. после этого они погибнут. Вводятся фибробласты 5 раз с интервалом 2 недели, мезотерапевтической техникой, в верхние слои кожи. Такая методика обеспечивает стабильность результата и омолаживающий эффект. При этом хорошо работает правило: чем больше площадь обработки, тем значительнее омоложение.

Р езультат от терапии собственными фибробластами накопительный, он появляется на уровне ощущений спустя 1-1,5 месяца от начала процедур (как правило, к третьей) и затем постепенно усиливается до 12-18 месяцев, а затем остается стабильным от 5 лет и более. Это метод естественного омоложения кожи, абсолютно безопасный, высокоэффективный и «долгоиграющий». Введение фибробластов направлено на улучшение качества кожи, т.е. ее тургора, тонуса, цвета, плотности и т.д., НО никогда не приводит к лифтингу !

Е сли же Вы начали замечать, что фибробласты снижают свою активность – их легко простимулировать лазерной терапией (СО, диодный, неодимовый лазеры, действующие надерму), эффект от которой будет намного выраженнее и заметнее.

В области эстетической медицины одно из приоритетных направлений в последние 30-40 лет - это решение вопросов коррекции возрастных изменений с помощью регенеративных биотехнологий. Оно основано на способности клеток к регенерации, то есть к самостоятельному восстановлению. Точка приложения в косметологии - кожные фибробласты. Их обновление позволяет воздействовать не только на регенерацию остальных кожных клеток и структур, но и устранять различные дефекты, в том числе и возрастные морщины. Восстанавливается не просто сама кожа, но и ее молодые свойства.

Представление о фибробластах и их функции

Фибробласты - это основные клетки соединительных тканей, происходящие от стволовых клеток мезенхимы, представляющей собой зародышевую ткань человека и животных. Они имеют ядро и характеризуются разнообразной формой, в зависимости от активности: активные клетки имеют большую величину и отростки, неактивные - веретенообразную форму и меньшие размеры.

Их функция заключается в синтезе межклеточного матрикса соединительной ткани. Матрикс представляет собой ее основу, которая обеспечивает транспорт химических элементов и механическую поддержку клеток. Основными компонентами матрикса являются белки гликопротеины, среди которых превалируют , протеогликаны, эластин, фибрин и другие. Фибробласты кожи расположены в ее среднем слое. Они играют значительную роль в регенерации эпителиальных клеток, продуцируя многие факторы клеточного роста (тканевые белковые гормоны):

1. Трансформирующий (различных типов) - способствует стимулированию синтеза коллагена и эластина, формированию мелких сосудов, а также движению фагоцитов к инородному элементу.
2. Эпидермальный, ускоряющий разрастание тканей путем клеточного деления и перемещение кератиноцитов, синтезирующих кератин (пигмент).
3. Основной - усиливает рост всех кожных клеток, выработку фибронектина, участвующего в защитных реакциях организма, коллагена и эластина.
4. Фактор роста кератиноцитов, который способствует эпителизации и заживлению поврежденных участков кожи.

Фибробласты вырабатывают и продуцируют также белки:

• тинасцин, участвующий в регулировании нормального распределения коллагена и эластина в ткани;
• нидоген и ламинин (пептиды, входящие в состав базальной мембраны кожи и являющиеся для нее строительным материалом);
• протеогликаны, которые играют роль во взаимодействии клеток и другие.

Под влиянием свободных радикалов и других факторов происходит старение коллагеновых и эластиновых волокон, которые подвергаются дальнейшему расщеплению коллагеназой (вырабатывается теми же фибробластами) и эластазой на составные элементы. Их молекулы используются фибробластами для новой выработки предшественников коллагена и эластина

Таким образом, функция фибробластов заключается в участии в едином замкнутом процессе разрушения-регенерации клеток и волокон.

Использование фибробластов в косметологии

Возрастные изменения тканей организма

Старение тканей - это закономерный биологический системный процесс, который начинается с 25-30 лет и затрагивает все клетки, в том числе и кожи. Одной из основных причин является снижение способности фибробластов в плане активного синтеза и пролиферации в тканях кожи, в результате чего происходит снижение содержания их главных компонентов - гиалуроновой кислоты, коллагена, эластина, сосудистой сети.

Это отражается на внешнем виде кожного покрова. Он истончается, становится сухой, бледнеет, происходит снижение степени эластичности и упругости, замедляется восстановление жирового барьера, образуются сети мелких морщин, которые постепенно углубляются, происходит птоз кожи и формирование складок. В то же время функции катаболического (разрушительного) характера еще длительное время остаются на прежнем уровне. Ответственны за все эти изменения в основном клетки фибробласты, являющиеся одним из главных компонентов дермы. В возрасте после 30 лет их количество снижается в геометрической прогрессии каждые 10 лет на 10-15%.

Эти процессы протекают неравномерно в различных зонах кожной поверхности тела. Больше всего возрастным изменениям подвержены открытые участки и места сгибов - лицо, шея, верхние отделы грудной клетки по передней поверхности (зона «декольте»), кисти, кожа в области локтевых и лучезапястных суставов.

Биоинженерия в косметологии

Сегодня, благодаря успехам биотехнологии, появилась возможность естественным путем повлиять непосредственно на причину возрастного увядания кожных тканей. Этого удалось достигнуть способом обогащения ее собственными молодыми фибробластами, которые являются строителями внеклеточного матрикса.

Трансплантация в кожу лица собственных молодых клеток фибробластов способна эффективно и достаточно быстро активизировать процессы обновления и восстановления ее структуры. Результатом является улучшение цвета лица, гидратации, эластичности и тургора тканей, исчезновение мелких рубчиков, образовавшихся в результате различных кожных заболеваний, уменьшение количества и глубины морщин.

Преимуществом клеточного омоложения является и то, что трансплантированные фибробласты долгое время (от полугода до полутора лет) сохраняют функциональную активность в части усиленного синтеза гиалуроновой кислоты, коллагена, эластина и других компонентов матриксной системы кожи. В течение этого срока постоянно продолжается улучшение ее состояния.

Клетки для трансплантации получают из кусочка кожи диаметром 3-5 мм, взятого из заушной или пупочной области, где кожа меньше всего подвержена воздействию ультрафиолетового облучения. Биоптат подвергается исследованию и специальной обработке с целью культивирования молодых фибробластов в лабораторных условиях в течение 1 месяца, после чего с помощью инъекций вводится в необходимые зоны. Аутологичные (свои) клетки не воспринимаются собственной иммунной системой как антиген (чужеродные) и, следовательно, организмом не отторгаются, а полноценно функционируют.

Нередко уже после первой процедуры аутотрансплантации наступает заметное улучшение состояния кожи, а через две недели после окончания курса процедур сами пациенты уже замечают значительное улучшение тона и контуров лица, повышение тургора и толщины кожи, уменьшение числа морщин и их глубины. Через полгода после трансплантации клеток в коже определяются их группы на фоне увеличившегося количества волокон коллагена. В течение полугода глубина морщин вокруг глаз уменьшается в среднем на 90%, в зонах «декольте» и шеи- на 95%, щек - на 87%, вокруг рта - на 55%.

Введение полученного материала в дерму осуществляется тоннельным способом под местной анестезией посредством нанесения крема с анестетиками на кожу. Курс лечения состоит из 2-х процедур с интервалом 1-1,5 месяца. После введения фибробластов они распределяются в дермальном слое небольшими группами и не подвержены митотическому делению, что исключает процессы перерождения их в опухолевые клетки.

Препараты для трансплантации проходят лабораторный контроль на предмет биологической безопасности и жизнеспособности клеток. Методика аутотрансплантации фибробластов в косметологии получила официальное разрешение Росздравнадзора.

1. Продукция всех компонентов межклеточного вещества (волокон и основного аморфного вещества). Фибробласты синтезируют коллаген, эластин, фибронектин, гликозаминогликаны и др.

2. Поддержание структурной организации и химического гомеостаза межклеточного вещества (за счет сбалансированных процессов его выработки и разрушения).

3. Регуляция деятельности других клеток соединительных тканей и влияние на другие ткани. Продукция цитокинов (колониестимулирующих факторов гранулоцитов и макрофагов).

4. Заживление ран. При воспалении и заживлении ран фибробласты активируются макрофагами.

Рис. 3.2. Рыхлая и волокнистая соединительные ткани – пленочный препарат I – основное вещество; II – коллагеновые волокна; III – эластические волокна; IV – клетки; V – кровеносный сосуд. 1 – фибробласты, 2 – фиброцит, 3 – макрофаги, 4 – тучные клетки, 5 – плазмоциты, 6 – лейкоциты, 7 – жировая клетка.

Рис.3.3. Электронограмма фибробласта среди коллагеновых волокон
(х 18.500).

Ct- поперечные,

Сl – продольные срезы коллагеновых волокон;

N – ядро клетки смещено на периферию;

ER – эндоплазматический ретикулум;

G – комплекс Гольджи.

Рис. 3.4. Актиновые микрофиламенты в цитоплазме миофибробласта (иммунофлюоресцентный метод).

Макрофаги. На втором месте в количественном отношении среди клеток рыхлой соединительной ткани стоят макрофаги Макрофаги образуются путем дифференцировки и размножения, вышедших в ткань из крови моноцитов. Различают свободные и фиксированные макрофаги.По сравнению с фибробластами они меньших размеров 10-15 мкм. Имеют различную форму - округлую, вытянутую или неправильную. В базофильной цитоплазме макрофагов содержится много лизосом, фагосом, пиноцитозных пузырьков. Умеренное развитие имеют митохондрии, ЭПС, комплекс Гольджи. Макрофаги – активно фагоцитирующие клетки, богатые органеллами для внутриклеточного переваривания поглощенного материала (лизосомы) и синтеза антибактериальных и других биологически активных веществ (пироген, антиферон, лизоцим, ЭПС). Ядра содержат больше хроматина и окрашиваются более интенсивно, чем ядра фибробластов. Цитоплазма макрофагов образует глубокие складки и длинные микроворсинки, которые обеспечивают захват инородных частиц. Поверхность макрофага имеет рецепторы чувствительные к эритроцитам, T и B-лимфоцитам, антигенам и иммуноглобулинам. Последние обеспечивают возможность их участия в иммунных реакциях организма.

А

Б

Рис. 3.5. Ультраструктура макрофага. А – активная форма, Б –поверхность макрофага (х11.600). Сканирующая электронная микроскопия. 1– отростки клетки. Pp, 1 –псевдоподии; Р –фагоцитированные частицы; М – митохондрии; L – лизосомы. Ядро неправильной формы.

Макрофаги наряду со способностью к фагоцитозу синтезируют целый ряд веществ, обеспечивающих врожденный иммунитет (лизоцим, интерферон, пироген и др.). Макрофаги секретируют медиаторы - монокины, способствующие специфической реакции на антигены и цитолитические факторы, которые избирательно разрушают опухолевые клетки.

Функции макрофагов:

1. фагоцитоз: распознавание, поглощение и переваривание поврежденных, зараженных, опухолевых и погибших клеток, компонентов межклеточного вещества, а также экзогенных материалов и микроорганизмов.

2. участие в индукции иммунных реакций, т.к. (играют роль антиген-представляющих клеток).

3. регуляция деятельности клеток, других типов (фибробластов, лимфоцитов, тучных клеток, эндотелиоцитов и др.).

Макрофаги развиваются из моноцитов. Совокупность клеток, имеющих одно ядро, называется монокулиарной фагоцитарной системой, и мононукледов, обладающих способностью к фагоцитозу: захватывать из тканевой жидкости организма инородные частицы, погибающие клетки, неклеточные структуры, бактерии и др. Фагоцитированный материал подвергается внутри клетки ферментативному расщеплению (“завершенный фагоцитоз”), благодаря чему ликвидируются вредные для организма агенты, возникающие местно или проникающие извне. Макрофаги (гистиоциты) рыхлой волокнистой соединительной ткани, звездчатые клетки синусоидных сосудов печени, свободные и фиксированные макрофаги кроветворных органов (костного мозга, селезенки, лимфатических узлов), макрофаги легкого, воспалительных экссудатов (перитонеальные макрофаги), остеокласты, гигантские клетки инородных тел и глиальные макрофаги нервной ткани (микроглия). Все они способны к активному фагоцитозу, имеют на своей поверхности рецепторы к иммуноглобулинам и происходят из промоноцитов костного мозга и моноцитов крови. В отличие от таких “профессиональных” фагоцитов способность к факультативному поглощению может быть выражена независимо от указанных циторецепторов у других клеток (фибробласты, ретикулярные клетки, эндотелиоциты, нейтрофильные лейкоциты). Но эти клетки не входят в состав макрофагической системы.

И.И. Мечников (1845-1916) первым пришел к мысли о том, что фагоцитоз, возникающий в эволюции как форма внутриклеточного пищеварения и закрепившийся за многими клетками, одновременно является важным защитным механизмом. Он обосновал целесообразность объединения их в одну систему и предложил назвать ее макрофагической. Макрофагическая система представляет собой мощный защитный аппарат, принимающий участие, как в общих, так и в местных защитных реакциях организма. В целостном организме макрофагическая система регулируется как местными механизмами, так нервной и эндокринной системами. В 30-40-х годах эту защитную систему называли ретикулоэндотелиальной. В последнее время ее называют системой мононуклеарных фагоцитов, что, однако, неточно характеризует ее в связи с тем, что среди клеток, входящих в эту систему, есть и многоядерные (остеокласты).

Плазматические клетки – плазмоциты имеют округлую форму. Величина плазматических клеток от 7 до 10мкм. Ядро округлой или овальной формы лежит, как правило, эксцентрично. Глыбки хроматина в нем расположены по радиусам. Они напоминают пирамиды, основание которых лежит на ядерной оболочке. Создается впечатление, что хроматин расположен в виде спиц в колесе. Данное обстоятельство служит одним из диагностических признаков при определении плазмоцитов.

А

Б

В

Рис. 3.6. Плазматическая клетка. А – в мазке крови. Б – схема. В – электронограмма.

Цитоплазма клеток резко базофильна, особенно по периферии. В центре перед ядром имеется небольшое просветление - "дворик". Он содержит сетчатый аппарат, центриоли, митохондрии. Цитохимически в плазматических клетках обнаруживается громадное количество рибонуклиопротеидов, обусловливающих базофилию цитоплазмы. Среди белков обнаруживается много – γ-глобулина. С ним связывается основная функция клеток - участие в защитных реакциях организма.

Зрелые плазматические клетки характеризуются высокой базофилией и эксцентрично расположенным ядром. Под электронным микроскопом определяются параллельные мембраны. Наличие параллельных мембран в цитоплазматической сети характерно для клеток, синтезирующих белок на “экспорт”. Вырабатываемый плазматической клеткой белок может иметь различный состав и определяется качеством белка раздражителя или антигена. Поэтому мы говорим, что синтез белка в плазматических клетках - частное выражение способности этих клеток принимать участие в белковом обмене. Наряду с этим цитоплазма клетки выделяет небольшое количество гликозаминогликанов, поступающих в межклеточное вещество.

Сравнение концентрации глобулина показало, что в зрелых клетках его меньше, чем в незрелых. В последнее время считают, что зрелая клетка - это плазматическая клетка в состоянии покоя. При встрече с антигеном, раздражителем она также может интенсивно образовывать глобулин и по своим морфологическим признакам приближаться к той клетке, которую называют "незрелой". Плазматические клетки называют иммунокомпетентными, т. к. они сохраняют "память" об антигенных раздражителях и при повторной встрече с ним блокируют антиген специфическим антителом.

Одно из проявлений иммунной реакции у позвоночных животных при попадании в организм чужеродного агента - выделение плазматическими клетками антител.

В цитоплазме плазматических клеток могут появляться кристаллические включения, воспринимающие кислые красители, так называемые тельца Русселя. Считают, что они являются конгломератами глобулинов, синтезированных ранее этой клеткой.

Плазматические клетки обеспечивают гуморальный иммунитет путем выработки антител. За 1 секунду каждый плазмоцит синтезирует до нескольких тысяч молекул иммуноглобулииов (более 10 млн. молекул в час).

Тканевые базофилы (лаброциты, тучные клетки). Тучные клетки – постоянный клеточный компонент рыхлой волокнистой соединительной ткани, осуществляющий важные регуляторные функции. Эти клетки имеют в цитоплазме зернистость, напоминающую гранулы базофильных лейкоцитов. Они являются регуляторами местного гомеостаза соединительной ткани.

А

Б

Рис. 3.7. Структура тучной клетки А – Тучные клетки (М) в составе соединительной ткани (х1200); Б – рельеф клеточной поверхности.

Развитие тучных клеток осуществляется в тканях из предшественника, который имеет, как предполагают, костномозговое происхождение. На их дифференцировку и рост влияют факторы клеточного микроокружения (фибробласты, эпителиальные клетки и их продукты). В отличие от базофилов, которые после миграции в ткани живут недолго (от нескольких часов до нескольких суток), тучные клетки обладают сравнительно большой продолжительностью жизни (от нескольких недель до нескольких месяцев). В течение этого периода под действием соответствующих стимулов тучные клетки, очевидно, способны делиться.

Рис. 3.8. Электронограмма тучной клетки (х12.000). G – крупные гранулы заполняют всю цитоплазму; Мi – митрхондрии расположенные между ними, в центре расположено ядро.

Тканевые базофилы имеют разнообразную форму. У человека и млекопитающих чаще их форма овальная. Размеры 3,5х14 мкм. Ядро небольшое, богатое хроматином. Встречаются двуядерные клетки.

Гранулы тучных клеток содержат разнообразные биологически активные вещества. Субмикроскопически они представляют плотные тельца неправильной формы диаметром 0,3-1,4 мкм, окрашиваются метахроматично. Клетки содержат митохондрии, внутриклеточный сетчатый аппарат. Компоненты тучных клеток у различных животных и в различных участках соединительной ткани различные. У кроликов и морских свинок тучных клеток мало, у белых мышей очень много. У человека и животных тучные клетки обнаружены во всех местах, где имеются прослойки рыхлой соединительной ткани. Они расположены группами по ходу кровеносных и лимфатических сосудов. Количество тучных клеток изменяется при различных состояниях организма - при беременности увеличивается количество тучных клеток в матке и молочных железах, в желудке и кишечнике в разгар пищеварения. Тучные клетки содержат разнообразные медиаторы и ферменты.

Структурно-функциональные различия тучных клеток. Популяция тучных клеток образована элементами, которые обладают неодинаковыми морфофункциональными свойствами и могут качественно и количественно различаться даже в пределах одного органа. Высказывают предположение о том, что отдельные субпопопуляции тучных клеток выполняют в организме неодинаковые функции.

Функции тучных клеток:

1. Гомеостатическая , которая осуществляется в физиологических условиях путем медленного выделения небольших количеств биологически активных веществ, способных влиять на различные тканевые функции – в первую очередь, на проницаемость и тонус сосудов, поддержание баланса жидкостей в тканях.

2. Защитная и регуляторная, которая обеспечивается путем локального выделения медиаторов воспаления и хемотаксических факторов, обеспечивающих (а) мобилизацию эозинофилов и различных эффекторных клеток, участвующих в так называемых реакциях поздней фазы; (б) воздействие на рост и созревание соединительной ткани в зоне воспаления.

3. Участие в развитии аллергических реакций вследствие наличия высокоаффинных рецепторов к иммуноглобулинам класса Е (IgE) на их плазмолемме и функциональной связи этих рецепторов с секреторным механизмом. Участие тучных клеток в развитии аллергических реакций, как и базофильных гранулоцитов включает:

Ø связывание IgE с высокоаффинными рецепторами на их плазмолемме;

Ø взаимодействие мембранного IgE с аллергеном;

Ø активацию и дегрануляцию тучных клеток с выделением содержащихсяв их гранулах веществ и продукцией ряда новых.

Ø предполагается, что тучные клетки выполняют магниторецепторную функцию.

Дегрануляция может опосредоваться также рецепторами комплемента или вызываться белками нейтрофилов, протеиназами, нейропептидами (вещество Р, соматостатин), лимфокинами.

По подсчетам Уокера полная смена тучных клеток рыхлой соединительной ткани может произойти за 16 – 18 месяцев. По данным Н.Г.Хрущева за 9 дней.

Таблица 3.2.

Медиаторы и ферменты, содержащиеся в тучных клеток

Медиатор	Функция
Гистамин	Н 1 , Н 2 – рецептор опосредованное действие на гладкомышечные клетки (ГМК), эндотелий, нервные волокна. Вазодилатация, повышение проницаемости капилляров, отек, хемокинез, бронхоспазм, стимуляция афферентных нервов
Химаза	Расщепление коллагена IV типа, глюкагона, нейротензина, фибронектина
Триптаза	Конверсия С3 в С3а, расщепление фибриногена, фибронектина, активация коллагеназы
Карбоксипептидаза В	Разборка внеклеточного матрикса
Дипептидаза	Конверсия LTD 4 в LTE 4 . Разрушение внеклеточного матрикса
Кининогеназа	Конверсия кининогена в брадикинин
Инактиватор фактора Хагемана	Инактивация фактора Хагемана
Гексозаминидаза, глюкуронидаза, галактозидаза	Разрушение внеклеточного матрикса (гликопротеинов, протеогликанов)
β-Гликозаминидаза	Расщепление гликозаминов
Пероксидаза	Конверсия Н 2 О 2 в Н 2 О, инактивация лейкотриенов, образование липидных пероксидов
Фактор хемотаксиса эозинофилов (ECF)	Хемотаксис эозинофилов
Фактор хемотаксиса нейтрофилов (NCF)	Хемотаксис нейтрофилов
Гепарин	Антикоагулянт, избирательно связывает антитромбин III. Ингибитор альтернативного пути активации комплемента. Модифицирует активность других ранее синтезированных медиаторов.
Простагландин PGD 2 , тромбоксан TXA 2	Сокращение ГМК бронхов, вазодилатация, увеличение сосудистой проницаемости, агрегация тромбоцитов
Лейкотриены LTC 4 , LTD 4 , LTE 4 , медленно реагирующий фактор анафилаксии SRS-A	Вазо- и бронхоконстрикция, увеличение сосудистой проницаемости, отеки. Хемотаксис и /или хемокинез

Жировые клетки, липоциты. Различают две разновидности жировых клеток: клетки белого и бурого жира. Клетки белого жира моновакуалярные, имеют одну жировую вакуоль. Они располагаются в рыхлой соединительной ткани главным образом по ходу сосудов, а в некоторых участках организма (под кожей, между лопатками, в сальнике и других местах) образуя значительные скопления. Это позволяет выделить специальную жировую ткань, построенную почти исключительно из жировых клеток. Жировые клетки имеют шарообразную форму. Они больше по размеру других клеток соединительной ткани. Их диаметр 30-50 мкм. Непосредственными предшественниками жировых клеток являются малодифференцированные соединительнотканные клетки, расположенные главным образом около капилляров (перикапиллярные или адвентициальные клетки). Возможно образование липоцитов из гистиоцитов, фагоцитирующих жировые капли. В процессе дифференцировки в жировой клетке накапливаются мелкие капли нейтрального жира, которые путем слияния образуют более крупные. Основная функция липоцитов - запас жира как макроэргического соединения. При распаде его высвобождается большое количество энергии, используемой организмом как источник тепла, а также для фосфорилирования АДФ с образованием АТФ. Жир служит источником образования воды, выполняет защитную и опорную функцию. Жировые клетки синтезируют биологически активные вещества – лептин, регулирующий чувство насыщения, эстрогены и т.п.

А

Б

Рис.3.9. Клетки белого жира (апудоциты, моновакуолярные клетки) А- совокупность жировых клеток образует жировую дольку, снабженную большим количеством кровеносных сосудов (С) х480); Б – электронная микрофотография периферии 2-х апудоцитов, L – жировая вакуоль; D – мелкие капельки жира; М- митохондрии; С-коллагеновые волокна в межклеточном пространстве. (х6.000).

Рис. 3.10. Электронная микрофотография клетки бурого жира: Ядро расположено в центре,

L – жировые вакуоли,

М- митохондрии,

С – капилляры.

Жировые клетки кроме роли энергетического депо выполняют функции эндокринной железы, гормоны которой регулируют объем и массу тела. Этим гормоном является лептин .

Белая жировая ткань составляет 15-20 % массы тела взрослых самцов и на 5 % больше у самок. В некотором смысле о ней можно говорить как о крупном метаболически активном органе, поскольку она участвует главным образом в поглощении из крови, синтезе, хранении и мобилизации нейтральных липидов (жиров). (Мобилизовать жир – значит сделать его подвижным, с тем чтобы использовать как горючее” в других частях тела.) В жировой клетке при температуре тела жир находится в состоянии жидкого масла. Он состоит из триглицеридов содержащих три молекулы жирной кислоты, образующие эфир с глицерином. Триглицериды – наиболее калорийный вид питательных веществ, поэтому жир в жировых клетках представляет собой хранилище „высококалорийного” горючего, притом относительно легкого. Кроме того, у обитателей холодных стан жир участвует в регуляции температуры лежащих под ним органов. И, наконец, жир служит отличным заполнителем различных „щелей” в организме и образует „подушки”, на которых могут лежать те или иные внутренние органы.

Бурые жировые клетки обнаружены у новорожденных детей и у некоторых животных на шее, около лопаток, за грудиной, вдоль позвоночника, под кожей между мышцами. Она состоит из жировых клеток, густо оплетенных гемокапиллярами. Клетки бурого жира -поливакуолярные. Диаметр клеток бурого жира почти в 10 раз меньше, чем диаметр клеток белого жира. Эти клетки принимают участие в процессах теплопродукции. Адипоциты бурой жировой ткани имеют множество мелких жировых включений в цитоплазме. По сравнению с клетками белой жировой ткани здесь обнаруживается множество митохондрий. Бурый цвет жировым клеткам придают железосодержащие пигменты – цитохромы митохондрий. Окислительная способность бурых жировых клеток примерно в 20 раз выше белых и почти в 2 раза превышает окислительную способность мышцы сердца. При понижении температуры окружающей среды активность окислительных процессов в бурой жировой ткани повышается. При этом выделяется тепловая энергия, обогревающая кровь в кровеносных капиллярах. В регуляции теплообмена определенную роль играет симпатическая нервная система и гормоны мозгового вещества надпочечников – адреналин и норадреналин, который через циклический аденозинмонофосфат стимулирует активность тканевой липазы, расщепляющей триглицериды на глицерин и жирные кислоты. Последние, накапливаясь в клетке, разобщают процессы окислительного фосфорилирования, что приводит к высвобождению тепловой энергии, обогревающей кровь, протекающую в многочисленных капиллярах между липоцитами. При голодании бурая жировая ткань изменяется меньше, чем белая.

Пигментоциты (пигментные клетки).содержат в своей цитоплазме пигмент меланин. Они имеют отростчатую форму и подразделяются на два вида - меланоциты , которые вырабатывают пигмент, и – меланофоры , способные лишь накапливать его в цитоплазме. У людей черной и желтой рас пигментные клетки более распространены, чем определяется неизменяемый в зависимости от времени года цвет кожи. Пигментоциты имеют короткие непостоянной формы отростки. Эти клетки лишь формально относятся к соединительной ткани, так как располагаются в ней. В настоящее время имеются веские доказательства того, что эти клетки образуются из нервных гребней, а не из мезенхимы.

Таблица 3.3. Различия между белой и бурой жировыми клетками

Белая жировая клетка	Бурая жировая клетка
Широко распространена у человека: в т.ч. находится - в подкожной жировой клетчатке, - в сальнике, - в жировых отложениях вокруг внутренних органов, - в диафизах трубчатых костей (жёлтый костный мозг) и т.д.	а) Встречается у новорождённых детей - в области лопаток, - за грудиной и в некоторых других местах. б) У взрослого человека находится в воротах почек и в корнях лёгких. У животных, впадающих в спячку
В клетках ядра оттеснены к периферии.	Ядра расположены в центре клеток.
В клетках - одна большая жировая капля.	В клетках - много мелких жировых капель.
Количество митохондрий невелико.	В цитоплазме - много митохондрий (откуда - бурый цвет ткани).
Функции клетки: депонирование жира, ограничение теплопотерь, механическая защита.	Функция - обеспечение теплопродукции.
жир из белой жировой клетки расходуется, главным образом, не в ней самой, а в иных органах и тканях,	а жир бурой жировой клетки расщепляется для обеспечения теплопродукции непосредственно в ней самой.

Адвентициальные клетки . Это малоспециализированные клетки, сопровождающие кровеносные сосуды. Они имеют уплощенную или веретенообразную форму со слабобазофильной цитоплазмой, овальным ядром и слаборазвитыми органеллами. В процессе дифференцировки эти клетки, по-видимому, могут превращаться в фибробласты, миофибробласты, адипоциты. Многие авторы отрицают существование адвентициальных клеток как самостоятельного клеточного типа, считая их клетками фибробластического ряда.

Эндотелиальные клетки – выстилают сосуды, поэтому их совокупность называется сосудистым эндотелием. Строение сосудистого эндотелия сходно со строением эпителиальной ткани. Эндотелию присущи следующие общие признаки.

1. Пограничное положение покровного эпителия и эндотелия.

2. Непрерывность эндотелиальной выстилки внутри всех кровеносных и лимфоносных сосудов у позвоночных.

3. Отсутствие основного промежуточного вещества по всей окружности клеток эндотелия и эпителия.

4. Наличие базальной мембраны, выполняющей функцию опоры и фиксации эндотелиальных клеток. Её основу, как и основу базальных мембран эпителия, составляет коллаген IV типа.

5. Гетерополярность в строении клеток. У эндотелиоцитов это проявляется в образовании микроворсинок на люминальной поверхности клеток (при относительной гладкости базальной), в неравнозначности элементов цитоскелета и концентрации микропиноцитозных везикул в цитоплазме противостоящих поверхностей клеток.

6. Специализированные контакты между эндотелиальными клетками по типу замыкающих, фибриллярные полоски которых располагаются ближе к люминальной поверхности клеток, чем подчеркивается её полярность.

7. Барьерная, секреторная, транспортная функции в их идеальном сочетании.

8. Рост эндотелия в тканевых культурах в виде монослоя клеток полигональной формы, обладающих выраженным контактным торможением.

В силу этого сходства многие исследователи относят эндотелий к эпителиальной ткани. Однако эндотелий происходит из мезенхимы, на основании чего его относят к соединительной ткани.

Эндотелиальные клетки играют важную роль в процессах транскапиллярного обмена, принимают участие в образовании тканевых мукополисахаридов, гистамина, фибринолитических факторов.

Функции эндотелия:

1. Транспортная – через него осуществляется избирательный двусторонний транспорт веществ между кровью и другими тканями. Механизмы: диффузия, везикулярный транспорт (с возможным метаболическим превращением транспортируемых молекул).

2. Гемостатическая – играет ключевую роль в свертывании крови. В норме образует атромбогенную поверхность; вырабатывает прокоагулянты (тканевый фактор, ингибитор плазминогена) и антикоагулянты (активатор плазминогена, простациклин).

3. Вазомоторная – участвует в регуляции сосудистого тонуса: выделяет сосудосуживающие (эндотелин) и сосудорасширяющее (простациклин, эндотелиальный релаксирующий фактор – окись азота) вещества; участвует в обмене вазоактивных веществ – ангаотензина, норадреналина, брадикинина.

4. Рецепторная – экспрессирует на плазмолемме ряд соединений, обеспечивающих адгезию и, и последующую трансэндотелиальную миграцию лимфоцитов, моноцитов и гранулоцитов.

5. Секреторная – вырабатывает митогены, ингибиторы и факторы роста, цитокины, регулирующие кроветворение, пролиферацию и дифференцировку Т- и В-лимфоцитов, привлекающие лейкоциты в очаг воспаления.

6. Сосудообразовательная – обеспечивает новообразование капилляров (ангиогенез) – как в эмбриональном развитии, так и при регенерации.

Перициты – клетки звездчатой формы, примыкающие снаружи к артериолам, венулам и капиллярам. Наиболее многочисленны в посткапиллярных венулах. Имеют собственную базальную мембрану, сливающуюся с базальной мембраной эндотелия, так что создается впечатление, что перицит заключен в расслоившуюся базальную мембрану эндотелия. Перицит охватывает стенку сосуда, что позволяет предположить их участие в регуляции просвета сосудов.

Перициты имеют дисковидное ядро с небольшими углублениями, содержат обычный набор органелл, мультивезикулярные тельца, микротрубочки и гликоген. В области, обращенной к стенке сосуда, содержат пузырьки. Около ядра и в отростках присутствуют сократительные белки, в т.ч. актин и миозин. Перициты покрыты базальной мембраной, но тесно связаны с эндотелиальной клеткой, т.к. базальная мембрана между ними может и отсутствовать. В этих местах выявлены щелевые и адгезионные контакты.

Функции перицитов четко не установлены. О конкретных функциях можно говорить с разной степенью вероятности.

1. Контрактильные свойства. Вероятно участие перицитов в регуляции просвета микрососуда.

2. Источник гладкомышечных клеток (ГМК). При заживлении ран и восстановлении сосудов перициты в течение 3-5 дней дифференцируются в ГМК.

3. 3.Влияние на эндотелиальные клетки. Перициты контролируют пролиферацию эндотелиальных клеток, как при нормальном росте сосудов, так и при их регенерации; модулируют функцию эндотелиальных клеток, регулируя транспорт макромолекул из капилляров в ткани.

4. Секреторная функция. Синтез компонентов базальной мембраны капилляра.

5. Участие в фагоцитозе.

Межклеточное вещество рыхлой волокнистой соединительной ткани состоит из волокон и основного аморфного вещества. Оно является продуктом деятельности клеток этой ткани, в первую очередь, фибробластов.

Функции межклеточного вещества рыхлой волокнистой соединительной ткани:

1. обеспечение архитектоники, физико-химических и механических свойств ткани;

2. участие в создании оптимального микроокружения для деятельности клеток;

3. объединение в единую систему всех клеток соединительной ткани и обеспечение передачи информации между ними;

4. воздействие на многочисленные функции различных клеток (пролиферацию, дифференцировку, подвижность, экспрессию рецепторов, синтетическую и секреторную активность, чувствительность к действию различных стимулирующих, ингибирующих и повреждающих факторов и т.п.). Этот эффект может осуществляться путем контактного воздействия компонентов межклеточного вещества на клетки, а также благодаря его способности накапливать и выделять факторы роста.

Коллагеновые волокна в составе разных видов соединительной ткани определяют их прочность. В рыхлой неоформленной волокнистой соединительной ткани они располагаются в различных направлениях в виде волнообразно изогнутых, спиралевидно скрученных, округлых или уплощенных в сечении тяжей толщиной 1-3 мкм и более. Длина их различна. Внутренняя структура коллагенового волокна определяется фибриллярным белком - коллагеном, который синтезируется на рибосомах гранулярной эндоплазматической сети фибробластов.

Рис. 3.11. I. Схема – уровни структурной организации коллагеновых волокон. II. Электронная микрофотография - коллагеновая фибрилла. Различают четыре уровня организации коллагеновых волокон: молекулы тропоколлагена (1), протофибриллы (2), фибриллы (3) и волокна (4).\

Коллагеновые волокна распространены не только в собственно соединительной ткани, но также в кости и хряще, где они соответственно называются оссеиновыми и хондриновыми. Эти волокна определяют прочность тканей на разрыв. В рыхлой неоформленной соединительной ткани они располагаются в различных направлениях в виде волнообразно изогнутых тяжей толщиной 1-3 мкм. Коллагеновые волокна состоят из пучков параллельно расположенных микрофибрилл толщиной в среднем 50-100 нм, связанных между собой гликозаминогликанами и протеогликанами. Их толщина зависит от числа фибрилл, которые имеют поперечную исчерченность (черные и светлые участки) с периодом повторяемости 64-70 нм. В пределах одного периода находятся вторичные полосы шириной 3-4 нм.

Коллагеновые структуры, входящие в состав соединительных тканей организма человека и животных, являются наиболее распространенными ее компонентами. Основным их компонентом является волокнистый белок - коллаген.

Коллаген - главный белок соединительной ткани, которая составляет свыше 50% веса организма человека и животных. Одновременно, по расчетам швейцарского ученого Ф. Верцара, на долю коллагена приходится около 30% общего количества белка в организме. Следовательно, коллаген в количественном отношении стоит среди белков на первом месте.

Расшифровка первичной структуры коллагена - важнейший этап развития этих знаний. Значение раскрытия структуры коллагена следует расценивать с учетом того большого интереса, который проявляют к коллагену в различных областях знаний. Он лежит в основе целых областей технологии. Все кожевенное производство - это по существу переработка коллагена. Денатурированный коллаген–желатин незаменимый компонент фото-киноматериалов. Из переработанного коллагена изготовляется множество материалов, применяющихся в ветеринарной и медицинской практике.

Экстрагированные из волокон молекулы коллагена имеют длину 200 нм и ширину 1,4нм. Они получили название тропоколлагена. Молекулы построены из трипластов - трех полипептидных цепочек, которые сливаются в единую спираль. Каждая цепочка содержит набор из трех аминокислот, закономерно повторяющихся на протяжении ее длины. Первая кислота в таком наборе может быть любой, вторая - пролин или лизин, третья – глицин.

Расположение аминокислот может варьировать, вследствие чего образуется четыре типа коллагена.

1 тип - в собственно соединительной ткани, кости, роговице глаза, склере, зубной связке и др.

2 тип - в гиалиновом и фиброзном хряще, стекловидном теле.

3 тип - в дерме кожи плода, кровеносных сосудах, в ретикулярных волокнах.

4 тип - в базальных мембранах, в капсуле хрусталика.

В 1973 году была расшифрована одна из полипептидных цепей коллагена, что представляется выдающимся событием. Коллаген значительно крупнее по молекулярному весу, чем другие изученные белки. Трудности работы по установлению структуры коллагена были обусловлены величиной молекулы и особой монотонностью его строения - частотой повторения аминокислотных остатков и их сочетаний, что сильно осложняло задачу исследований.

Молекулы коллагена имеют длину около 280 нм и ширину 1,4 нм. Они построены из триплетов - трех полипептидных цепочек, предшественника коллагена – проколлагена, свивающихся еще в клетке в единую спираль. Это первый , молекулярный, уровень организации коллагенового волокна. Проколлаген секретируется в межклеточное вещество.

Второй, надмолекулярный, уровень - внеклеточной организации коллагенового волокна - представляет агрегированные в длину и поперечно связанные с помощью водородных связей молекулы тропоколлагена, образующиеся путем отщепления концевых пептидов проколлагена. Сначала образуются протофибриллы, а 5-6 протофибрилл, скрепленных между собой боковыми связями, составляют микрофибриллы толщиной около 5 нм.

При участии гликозаминогликанов, также секретируемых фибробластами, формируется третий , фибриллярный и, уровень организации коллагенового волокна. Коллагеновые фибриллы представляют собой поперечно исчерченные структуры толщиной в среднем 20-100 нм. Период повторяемости темных и светлых участков 64-67 нм. Каждая молекула коллагена в параллельных рядах, как полагают, смещена относительно соседней цепи на четверть длины, что служит причиной чередования темных и светлых полос. В темных полосах под электронным микроскопом видны вторичные тонкие поперечные линии, обусловленные расположением полярных аминокислот в молекулах коллагена.

Четвертый , волоконный, уровень организации. Коллагеновое волокно, образующееся путем агрегации фибрилл, имеет толщину 1-10 мкм (в зависимости от топографии). В него входит различное количество фибрилл – от единичных до нескольких десятков. Волокна могут складываться в пучки толщиной до 150 мкм.

Коллагеновые волокна отличаются малой растяжимостью и большой прочностью на разрыв. В воде толщина сухожилия в результате набухания увеличивается на 50%, а в разбавленных кислотах и щелочах – в 10 раз, но при этом волокно укорачивается на 30%. Способность к набуханию больше выражена у молодых волокон. При термической обработке в воде коллагеновые волокна образуют клейкое вещество (греч. коllа - клей), что и дало название этим волокнам.

Ретикулярные (ретикулиновые, аргирофильные) волокна. Они встречаются в рыхлой и некоторых других видах соединительной ткани, в строме кроветворных органов, печени, внутренних оболочках сосудов. На препаратах импрегнированных серебром они располагаются в виде сети.

Рис. 3.12. Ретикулярные волокна в лимфатическом узле при импрегнации азотнокислым серебром. Волокна ветвятся, образуя тонкую сеть. ВV- кровеносный сосуд (х800).

Вопрос о природе ретикулярных волокон остается спорным. Большинство исследователей считают, что ретикулин - белок, составляющий основу этих волокон, представляет вещество близкое к коллагену, а импрегнационные и гистохимические отличия ретикулярных волокон от коллагеновых связаны со свойствами прошивающих волокна гликозаминогликанов. В отличие от коллагена и эластина ретикулин содержит больше серина, оксилизина и глютаминовой кислоты.

Эластические волокна. Эластические волокна придают ткани эластичность. Они менее прочны, чем коллагеновые на разрыв. В рыхлой соединительной ткани они образуют петлистую сеть, анастомозируя друг с другом. Толщина волокон от 0,2 до 1 мкм. В отличии от коллагеновых - они не имеют микроскопически видимых фибрилл и субмикроскопической поперечной исчерченности.

А

Б

Рис. 3.13. А - Эластические волокна в соединительной ткани (х320). Б - эластические волокна в стенке крупной артерии (х400), Е – тонкие эластические волокна, Сар - разветвленный капилляр, Р –плазматические клетки, С- коллагеновые волокна.

Основой эластических волокон является глобулярный гликопротеин - эластин, синтезируемый фибробластами и гладкими мышечными клетками (первый, молекулярный, уровень организации). Для эластина характерны большое содержание пролина и глицина и наличие двух производных аминокислот – десмозина и изодесмозина, которые участвуют в стабилизации молекулярной структуры эластина и придании ему способности к растяжению, эластичности. Молекулы эластина, имеющие глобулы диаметром 2,8 им, вне клетки соединяются в цепочки - эластиновые протофибриллы толщиной 3-3,5 нм (второй, надмолекулярный, уровень организации). Эластиновые протофибриллы в сочетании с гликопротеином (фибриллином) образуют микрофибриллы толщиной 8-19 нм (третий, фибриллярный, уровень организации). Четвертый уровень организации – волоконный. Наиболее зрелые эластические волокна содержат около 90% аморфного компонента эластических белков (эластина) в центре, а по периферии – микрофибриллы. В эластических волокнах в отличие от коллагеновых нет структур с поперечной исчерченностью на их протяжении.